Deneysel fibrosarkom modelinde Curcumin'in apoptoz üzerine etkisi

Abstract

Fibrosarkom, görülme sıklığı %2-3 olan ve sağ kalım oranı %50 olarak bildirilen bir yumuşak doku sarkomudur. Tedavide kullanılan lokal ekzisyon, radyoterapi ve kemoterapi yöntemleri her zaman başarılı olamayabilmektedir. Apoptoz programlanmış hücre ölümüdür. Bcl-2 ve bax, apoptoza aracılık eden bcl ailesine ait proteinlerdir. Bax proteini apoptotik, Bcl-2 proteini antiapoptotik etkiye sahiptir. Kanser tedavisinde kanserli hücrelerin apoptoza götürülerek temizlenmesi temel tedavi stratejisini oluşturmaktadır. Curcumin son yıllarda apoptotik etkisi ve bu etki nedeniyle kanserde tedavi amaçlı kullanımı çok araştırılan doğal bir moleküldür. Bu çalışmanın amacı; curcuminin fibrosarkom üzerine apoptotik etkisini ve Bcl-2, Bax proteinlerinin ekspresyonlarının nasıl etkilendiğini incelemektir. Çalışmaya 24 adet Wistar Albino erkek sıçan alındı. Sıçanlar kontrol (n=8), fibrosarkom (n=6), fibrosarkom+curcumin tedavi (n=5), sadece curcumin grubu (n=5) olmak üzere dört gruba ayrıldı. Fibrosarkom ve fibrosarkom+curcumin tedavi gruplarına 3-metilkolantren (3-MC) uygulayarak fibrosarkom modeli oluşturuldu. Daha sonra fibrosarkom+curcumin tedavi grubuna ve sadece curcumin grubuna gavaj yoluyla 10 gün sıçan başına 200 mg curcumin verildi. Apoptozun saptanması için doku kesitlerinde tunel yöntemi kullanılarak apoptotik hücre sayımı yapıldı. Bcl-2 ve bax proteinlerinin ekspresyonları Western blot ve immunohistokimyasal yöntemler kullanılarak gösterildi. Apoptotik hücreler fibrosarkom+curcumin grubunda fibrosarkom grubuna göre anlamlı olarak artmış bulundu (p=0.006). Sadece curcumin uygulanan grup ve kontrol grubu arasında değişiklik olmadığı görüldü.(p=0.448). Fibrosarkomda curcumin tedavisinin Bcl-2 protein ekspresyonunu istatistiksel olarak anlamlı olmamakla birlikte belirgin şekilde azalttığı saptandı (p=0.068). Bax ekspresyonu ise tedavi ile değişiklik göstermedi (p=0.223). Bizim çalışmamızda elde ettiğimiz sonuçlar, curcuminin fibrosarkom dokusu üzerine güçlü şekilde apoptotik etki yaptığını ve bu etkide bcl-2 ekspresyonunun rolü olduğunu, ancak Bcl-2 ekspresyonundaki azalmanın apoptotik hücre sayısındaki artış kadar güçlü olmaması nedeniyle, muhtemelen curcuminin apoptotik etkisinde farklı mekanizmaların da rol oynuyor olabileceğini göstermektedir. Ayrıca, curcumin normal dokuda apoptotik/antiapoptotik etki veya nekroz oluşturmamıştır. Curcuminin, fibrosarkomda tedavi amaçlı kullanımına yönelik farklı dozlar ve sürelerde ve ayrıca radyoterapi ve kemoterapi ile de kombine kullanıldığı ileri çalışmalar yapılması gereklidir.

Fibrosarcomais a soft tissue sarcom. Itis reported that the density of visibilitiy is %2-3 and the rate of remain alive is %50. The methods of local removal, radiotherapy and chemotherapy which are used in treatment can't be succesfull everytime. Apoptosis is a cell death which is programmed. Bcl-2 and Bax are proteins which belong to Bcl family and they mediate apoptosis. Bax protein has apoptotic effect and Bcl-2 protein has antiapoptotic effect. In cancer treatment, the clearance of taking cancerous cell to apoptosis composes the strategy of basic treatment. The fact that curcumin has apoptotic effect and is usage fort he purpose of cancer treatment because of this effect is natural molecule which has been searched in recent years. The aim of this study is invastigation apoptotic effect of curcumin on fibrosarcoma and whether expression of Bcl-2 and Bax proteins changed. 24 Wistar Albino male rats were taken in this study. Rats were divided into four groups: Control group (n=8), fibrosarcoma group (n=6), Fibrosarcoma + curcumin tretment group (n=5) only curcumin group (n=5). Fibrosarcom model was formed by applying 3-Metilcholantren (3-MC) to fibrosarcoma and fibrosarcoma + curcumin treatment groups. Then fibrosarcoma + curcumin treatment group and only curcumin group were given 200 mg curcumin for each rat viagavaj for ten days. To fix apoptosis, apoptotic cell counting was done by being used tunel method in tissue sections. Expression of Bcl-2 and Bax proteins were fixed by being used Western Blot and immunohistochemical methods. It was found that in comparison with fibrosarcoma group, apoptotic cell increased significantly in fibrosarcoma + curcumin group (p=0.006). It was seen that there was no difference between the group which was only applied for curcumin and control group (p=0,448). It was also seen that curcumin treatment reduced Bcl-2 protein expression importantly in fibrosarcoma (p=0,068). But it was not significant statistically. Bax expression not changed in fibrosarcoma + curcumin treatment group, comparison to fibrosarcoma group (p=0,223) Results which we gained in our study show that curcumin has strong apoptotic effect on fibrosarcoma tissue, Bcl-2 expression plays part in this effect, but different mechanisms have an influence on apoptotic effect of curcumin because of decrease in Bcl-2 expression isn't as powerful as increase in apoptotic cell number. Besides, curcumin doesn't form apoptotic/antiapoptotic effect or necrosis in normal tissue. It is necessary that further studies must be done in different doses and periods with radiotherapy and chemotherapy and curcumin must be used in fibrosarcoma for the purpose of treatment in these furter studies.