Akut  Lenfoblastik Lösemide ARID1A ve EZH2 Arasında Sentetik Letal İnteraksiyon İlişkisinin  Araştırılması

DSpace Ana Sayfası
→
Tez
→
Yüksek Lisans
→
Öğe Göster

dc.contributor.advisor	Kılıç Eren, Mehtap
dc.contributor.author	Koluman, Akıncan
dc.date.accessioned	2024-12-02T10:47:26Z
dc.date.available	2024-12-02T10:47:26Z
dc.date.issued	2024
dc.date.submitted	2024
dc.identifier.uri	http://hdl.handle.net/11607/5273
dc.description.abstract	ÖZET AKUT LENFOBLASTİK LÖSEMİDE ARID1A VE EZH2 ARASINDA SENTETİK LETAL İNTERAKSİYON İLİŞKİSİNİN ARAŞTIRILMASI Koluman A. Aydın Adnan Menderes Üniversitesi, Sağlık Bilimleri Enstitüsü, Tıbbi Biyoloji Programı, Yüksek Lisans Tezi, Aydın, 2024. Amaç: SWI/SNF kompleksi; kromatinin yeniden modellenmesini sağlayan proteinleri kodlayan genlerdir. İnsanlarda izlenen kanser türlerinde bu genler çoğunlukla mutasyona uğrarlar. SWI/SNF kompleksinin önemli bir alt birimi ARID1A’dır. ARID1A DNA’ya bağlanır ve SWI/SNF kompleksinin yeniden modellenmesi gereken kromatin konumuna hedeflenmesini sağlar. Kanser türlerinde yapılan genom çalışmalarında, sıklıkla ARID1A mutasyonu belirlenmiştir. Bununla beraber mtARID1A kanserlerde yapılmış olan çalışmalarda güvenlik açığı niteliğini taşıyan genlerin hedeflenmesi tipik olarak sentetik letaliteye neden olabilmektedir. Polycomb baskılayıcı kompleks 2’nin katalitik alt birimi olan EZH2, histon metilasyonunun ve transkripsiyonunun baskılanmasını sağlamaktadır. mtARID1A aracılığı ile SWI/SNF işlev bozuklukları, kromatin üzerindeki Polycomb aktivasyonunu kolaylaştırarak hücrelerin EZH2 inhibisyonuna karşı duyarlı hale getirmesini sağlar. Bu çalışmada kullanılan Jurkat hücrelerinde ARID1A’da çerçeve kayması mutasyonu bulunmaktadır ve EZH2’nin bir inhibitör ile inhibe edilmesiyle sentetik letalite etkilerinin araştırılması amaçlanmaktadır. Metot: GSK2816126 ile Jurkat hücrelerinde EZH2’nin inhibe edilmesi sağlandı. Hücrenin metabolik aktivasyonu (hücre canlılığını) ölçmek için WST-1 analizi, apoptozis ve nekroz ölçümü içi Annexin V/7AAD testi ve hücre döngüsü arrestlerini tespit etmek için hücre döngüsü analizleri yapılmıştır. Western Blot analizi ile ARID1A, EZH2, H3K27me3, total H3 ve GAPDH protein seviyeleri gösterildi. Bulgular: Jurkat hücrelerinin GSK2816126 ile muamelesi sonucu EZH2’nin inhibisyonu H3K27me3’ün WB analizi ile protein seviyesinde görülen azalma ile tespit edilmiştir. Jurkat hücrelerinde GSK2816126 ile EZH2’nın inhibisyonu zamana ve dozlara bağlı olarak hücre canlılığını azalttı ve apoptozu indükledi. 10 µM GSK2816126 muamelesi Jurkat hücrelerinde xi 120 saatin sonunda hücre canlılığını %60 oranında azalttığı ve apoptozun indüklendiği tespit edilmiştir. Jurkat hücrelerinde GSK2816126 muamelesi sonrası 24 saatte G0/G1 evresinde arrest olduğu hücre döngüsü testi ile tespit edilmiştir. Sonuç: mtARID1A olarak bulunan Jurkat hücrelerinde GSK2816126 ile EZH2’nin inhibe edilmesi apoptoz aracılığı ile sentetik letal etkiye yol açmaktadır. Bu sonuçlar ışığında ARID1A defektif Akut Lenfoblastik Lösemide EZH2’nin terapötik bir potansiyel hedef olabileceğine işaret etmektedir.	tr_TR
dc.description.tableofcontents	İÇİNDEKİLER KABUL VE ONAY ...................................................................................................i TEŞEKKÜR .............................................................................................................ii İÇİNDEKİLER........................................................................................................iii TABLOLAR............................................................................................................vi ŞEKİLLER .............................................................................................................vii SİMGELER VE KISALTMALAR...........................................................................ix ÖZET........................................................................................................................x ABSTRACT ...........................................................................................................xii 1. GİRİŞ............................................................................................................. 14 2. GENEL BİLGİLER........................................................................................ 17 2.1. Kanser ................................................................................................................. 17 2.1.1. Lösemi ve Sınıflandırılması........................................................................... 17 2.1.2. Akut Lenfoblastik Lösemi ............................................................................. 18 2.2. ARID1A.............................................................................................................. 19 2.3. EZH2................................................................................................................... 21 2.4. Sentetik Letalite................................................................................................... 22 3. GEREÇ VE YÖNTEMLER............................................................................ 23 3.1. Gereç.......................................................................................................... 23 3.1.1. Hücreler...................................................................................................... 23 iv 3.1.2. Çalışma Kimyasalları.................................................................................. 23 3.1.3. Kullanılan antikorlar................................................................................... 24 3.1.4. Kullanılan Sarf malzemeleri........................................................................ 25 3.1.5. Kullanılan Cihazlar..................................................................................... 25 3.2. Yöntem....................................................................................................... 26 3.2.1. Hücre Kültürü............................................................................................. 26 3.2.2. Dondurma................................................................................................... 26 3.2.3. Çözdürme ................................................................................................... 27 3.2.4. Sayım ......................................................................................................... 28 3.2.5. GSK2816126 (GSK126) Stoklarının Hazırlanması ..................................... 29 3.2.6. Hücre Testleri............................................................................................. 30 3.2.6.1. Jurkat Hücresinin Çalışmalara Hazırlanması ............................................ 30 3.2.6.2. Jurkat Hücresi ve WST-1......................................................................... 31 % Canlılık = (İLAÇ / KONTROL) x 100 ................................................................ 31 3.2.6.3. Apoptoz Analizi....................................................................................... 32 3.2.6.4. Hücre Döngüsü........................................................................................ 32 3.2.7. Western Blot............................................................................................... 33 Bu çalışma için proteinler izolasyonu ardından miktarlarının hesaplanması gerekmektedir..................................................................................................................... 33 3.2.7.1.1. İzolasyon .............................................................................................. 33 3.2.7.1.2. Protein Miktar Tayini............................................................................ 34 3.2.7.1.3. SDS-PAGE, Transfer ve Görüntüleme .................................................. 35 v 3.2.8. Grafiklerin Hazırlanışı ve İstatistiksel Analizlerin Belirlenmesi .................. 43 4. BULGULAR.................................................................................................. 44 4.1. WST-1 Testi Bulguları................................................................................ 44 4.2. Annexin-V Testi ......................................................................................... 47 4.4. Western Blot Analizi ile Jurkat Hücrelerinde GKS126 Kullanılarak EZH2 ve H3K27me3 Etkilerinin Belirlenmesi................................................................................... 53 5. TARTIŞMA ................................................................................................... 60 6. SONUÇ VE ÖNERİLER................................................................................ 65 7. KAYNAKÇA................................................................................................. 66 BİLİMSEL ETİK BEYANI..................................................................................... 69 ÖZ GEÇMİŞ.................................................................................................................. 70	tr_TR
dc.language.iso	tur	tr_TR
dc.publisher	T.C. Aydın Adnan Menderes Üniversitesi Sağlık Bilimleri Enstitüsü	tr_TR
dc.rights	info:eu-repo/semantics/openAccess	tr_TR
dc.subject	ARID1A, EZH2, Jurkat, Sentetik Letalite	tr_TR
dc.title	Akut Lenfoblastik Lösemide ARID1A ve EZH2 Arasında Sentetik Letal İnteraksiyon İlişkisinin Araştırılması	tr_TR
dc.type	masterThesis	tr_TR
dc.contributor.department	T.C. Aydın Adnan Menderes Üniversitesi Sağlık Bilimleri Enstitüsü Tıbbi Biyoloji Anabilim Dalı Yüksek Lisans Programı	tr_TR