dc.contributor.advisor |
BİLDİK, Ayşegül |
|
dc.contributor.author |
AKAR, Bilgehan |
|
dc.date.accessioned |
2024-02-12T08:25:46Z |
|
dc.date.available |
2024-02-12T08:25:46Z |
|
dc.date.issued |
2024 |
|
dc.date.submitted |
2024-01-17 |
|
dc.identifier.uri |
http://hdl.handle.net/11607/5113 |
|
dc.description.abstract |
Amaç: A549 kanser hücrelerinin 3D kültür yöntemi ile 2D kültür yönteminde glikoz ve glutamin kullanımındaki farklılığın, glikoliz ve TCA allosterik enzimleriyle gösterilmesi amaçlanmıştır.
Gereç ve Yöntem: A549 hücreleri, klasik hücre kültürü yöntemi ve 3D yöntemle, glikoz ve glutamininden ikisini veya birini içeren medyumlarda belirli sürelerde (24, 48, 72 saat) inkübe edildi. İnkübasyon sonunda hazırlanan hücre lizatlarında, ELISA kitleri kullanılarak enzim seviyeleri ölçüldü. Canlılık değerlendirmesi için MTT testi uygulandı. Verilerin istatistiksel analizi için, IBM SPSS Statistics 21 programı kullanıldı.
Bulgular: Glikozlu-glutaminli medyumda 2D ve 3D kültürlerde 24. saatte HK, PK, PDH, CS, IDH, α-KGDC enzim konsantrasyonlarında anlamlı farklılık belirlenmiştir. Glutaminli medyumdaki HK, 2D ve 3D kültürlerde tüm zaman aralıklarında anlamlı farklılık gösterirken, PFK 24 ve 72. saatlerde 3D kültürde daha yüksek konsantrasyona sahiptir. G6PDH ve α-KGDC'de 48 ve 72. saatlerde, CS'de 24 ve 72. saatlerde anlamlı farklılıklar gözlenmiştir. Glikozlu medyumdaki 2D ve 3D kültürlerde HK, G6PDH, PFK, IDH enzimlerinde tüm zaman aralıklarında anlamlı farklılık tespit edilmiştir. G6PDH ise tüm zaman aralıklarında 2D yönteminde yüksek konsantrasyona sahiptir. PK, PDH, CS, α-KGDC ve GDH enzim konsantrasyonlarında 2D ve 3D kültür ortamlarında anlamlı farklılıklar bulunmuştur.
Sonuç: 2D ve 3D yöntemler arasındaki canlılık ve enzim miktarındaki farklılıkların inkübasyon sürelerine bağlı olduğu görülmüştür. 2D ve 3D ortamlarının hücrenin metabolik aktivitesinde farklılıklara neden olduğunu, hücre kültürü çalışmalarının bu bağlamda ayrıntılı çalışılması gerektiği sonucuna varılmıştır. |
tr_TR |
dc.description.tableofcontents |
KABUL VE ONAY i
TEŞEKKÜR ii
İÇİNDEKİLER iii
SİMGELER ve KISALTMALAR DİZİNİ vi
ŞEKİLLER DİZİNİ x
RESİMLER DİZİNİ xiv
TABLOLAR DİZİNİ xv
ÖZET xvi
ABSTRACT xvii
1. GİRİŞ 1
2. GENEL BİLGİLER 4
2.1. Kanser 4
2.2. Kanserin Karakteristik Özellikleri 4
2.3. Hücresel Metabolizma 6
2.3.1. Normal Hücrelerde Glikoz Metabolizması 6
2.3.2. Normal Hücrelerde Glikoliz 6
2.3.3. Pentoz Fosfat Yolu 8
2.3.4. Trikarboksilik Asit Siklusu 10
2.3.4. Glutamin Metabolizması 11
2.4. Kanser Hücrelerinde Metabolizma 12
2.4.1. Kanser Hücrelerinde Glikoz Metabolizması 13
2.4.2. Kanser Hücrelerinde Glutamin Metabolizması 15
2.5. Kanser Enerji Metabolizmasının Kontrolünde Rol Oynayan Allosterik Enzimler 19
2.5.1. Hekzokinaz 19
2.5.2. Fosfofruktokinaz 20
2.5.3. Pirüvat Kinaz 21
2.5.4. Pirüvat Dehidrojenaz Kompleksi 23
2.5.5. Sitrat Sentaz 25
2.5.6. İzositrat Dehidrojenaz 25
2.5.7. α -Ketoglutarat Dehidrojenaz (2-Oksoglutarat Dehidrojenaz) 26
2.5.8. Glikoz-6-Fosfat Dehidrogenaz 27
2.5.9. Glutamat Dehidrojenaz 28
2.6.2 Hücre Kültürü 29
2.6.1. 3D Hücre Kültürü 30
2.6.2. 3D Sferoidlerin Özellikleri 31
2.6.2.1. Sferoidlerde Heterojenite ve Hücre-Hücre Sinyalleşmesi 31
2.6.2.2. Sferoidlerin Yapısı 32
2.6.2.4. Ekstrasellüler Matriks-Hücre ve Hücre-Hücre Etkileşimleri 33
2.6.2.5. Büyüme kinetiği 33
2.6.2.6. Gen Ekspresyonu 34
3. GEREÇ VE YÖNTEM 35
3.1. Gereç 35
3.1.1. Kullanılan Cihazlar ve Malzemeler 35
3.1.2. Kullanılan Kimyasal Maddeler 35
3.2. Yöntem 36
3.2.1. A549 hücresi 36
3.1.2. Hücre Kültürü Ortamı 36
3.1.4. Hücrelerin Pasajlanması 37
3.1.5. Hücre Sayımı 37
3.1.6 Hücrelerin 2D Yöntem ile Farklı Ortamlarda İnkübasyonu 38
3.1.7. Hücrelerin 3D Yönteme Hazırlanması ve Farklı Ortamlarda İnkübasyonu 38
3.1.7. Hücre Canlılık Testi (MTT) 39
3.1.8. Enzimlerin ELISA (Enzyme-Linked İmmunosorbent Assay) ile Tayini 40
3.1.9. İstatistiksel Değerlendirme 42
4. BULGULAR 43
4.1. Sferoidlerin Oluşturulması ve Morfolojisi 43
4.2. Hücre Canlılığının Değerlendirilmesi 44
4.3. Enzim Miktarlarının Değerlendirilmesi 47
4.3.1. ELISA ile Elde Edilen Hekzokinaz Sonuçları 47
4.3.2. ELISA ile Elde Edilen Glikoz-6-Fosfat Dehidrojenaz Sonuçları 51
4.3.3. ELISA ile Elde Edilen Fosfofruktokinaz Sonuçları 56
4.3.4. ELISA ile Elde Edilen Pirüvat Kinaz Sonuçları 60
4.3.5. ELISA ile Elde Edilen Pirüvat Dehidrojenaz Sonuçları 64
4.3.6. ELISA ile Elde Edilen Sitrat Sentaz Sonuçları 69
4.3.7. ELISA ile elde edilen İzositrat Dehidrojenaz Sonuçları 73
4.3.8. ELISA ile Elde Edilen α-Ketoglutarat Dehidrojenaz Kompleksi Sonuçları 78
4.3.9. ELISA ile Elde Edilen Glutamat Dehidrojenaz Sonuçları 82
5.TARTIŞMA 87
6. SONUÇ VE ÖNERİLER 97
KAYNAKLAR 98
BİLİMSEL ETİK BEYANI 121
ÖZ GEÇMİŞ 122 |
tr_TR |
dc.language.iso |
tur |
tr_TR |
dc.publisher |
Aydın Adnan Menderes Üniversitesi, Sağlık Bilimleri Enstitüsü |
tr_TR |
dc.rights |
info:eu-repo/semantics/embargoedAccess |
tr_TR |
dc.subject |
3D hücre kültürü, Glikoz, Glikoliz allosterik enzimleri, Glutamin, TCA allosterik enzimleri |
tr_TR |
dc.title |
A549 İNSAN AKCİĞER KANSER HÜCRELERİNİN ENERJETİK KULLANIMININ ALLOSTERİK GLİKOLİZ ENZİMLERİ DÜZEYİNDE 3D VE 2D KÜLTÜR ORTAMINDA KARŞILAŞTIRMALI ARAŞTIRILMASI |
tr_TR |
dc.type |
doctoralThesis |
tr_TR |
dc.contributor.department |
Aydın Adnan Menderes Üniversitesi, Veteriner Fakültesi, Biyokimya |
tr_TR |