MİDE KANSERİ HÜCRELERİNE SONODİNAMİK TERAPİ  UYGULAMASINDA HSP 70 İNHİBİSYONU VE KLORİN E6 YÜKLÜ  MİKROKABARCIKLARIN ROLÜ

DSpace Ana Sayfası
→
Tez
→
Doktora
→
Öğe Göster

dc.contributor.advisor	Bilgin, Mehmet Dinçer
dc.contributor.author	Bakay İlhan, Didem
dc.date.accessioned	2023-09-20T05:02:22Z
dc.date.available	2023-09-20T05:02:22Z
dc.date.issued	2023
dc.date.submitted	2023
dc.identifier.uri	http://hdl.handle.net/11607/5091
dc.description.abstract	MİDE KANSERİ HÜCRELERİNE SONODİNAMİK TERAPİ UYGULAMASINDA HSP 70 İNHİBİSYONU VE KLORİN E6 YÜKLÜ MİKROKABARCIKLARIN ROLÜ Bakay İlhan D. Aydın Adnan Menderes Üniversitesi, Sağlık Bilimleri Enstitüsü, Biyofizik (Tıp) Doktora Programı, Doktora Tezi, Aydın, 2023 Amaç: Araştırmamızın amacı mide kanseri hücrelerine sonodinamik terapi uygulamasında ısı şok protein 70 inhibisyonu ve klorin e6 yüklü mikrokabarcıkların rolünün araştırılmasıdır. Gereç ve Yöntem: Elde edilen mikrokabarcıkların boyut analizleri çeşitli yöntemlerle elde edildikten sonra MKN28 mide kanseri hücre hattında ısı şok protein 70’in inhibisyonunu sağlamak için hücreler 48 saat pifithrin-μ ile inkübe edilmiştir. Pifithrin-μ inkübasyonunu takiben ultrases (1MHz, 3W/cm2 , %20 puls, 30sn) ile yıkımı sağlanan klorin e6 yüklü mikrokabarcıklar varlığında 12 saat inkübe edilmiştir. Son olarak gruplar arasında sitotoksisite ve apoptoz süreçleri hakkındaki farklılıklar moleküler yöntemlerle incelenmiştir. Bulgular: Boyut analizleri sonucunda elde edilen mikrokabarcıkların 1-5µm boyutunda dağılım gösterdiği gözlenmiştir. Klorin e6 içeren mikrokabarcıkların ultrases ile yıkımı esnasında istatistiksel anlamlı artan kavitasyon verisi elde edilmiştir. Spektroskopik ölçümler sonucunda klorin e6 trisodyum salt çözeltisinde agregasyon oluşmadığı fakat farklı ölçümlerle de teyit edilmesi gereken bir bulgu olduğu düşünülmektedir. Yapılan sitotoksisite testleri sonucunda 1MHz frekans ve 3W/cm2 güçte 30sn süresince %20 puls ultrases uygulanmasına karar verilmiştir. Uygulama dozu olarak pifithrin-μ için 5μM ve klorin e6 için 5μM dozları seçilmiştir. Deney grupları incelendiğinde klorin e6 yüklü mikrokabarcıkların ultrases ile yıkımı sonucu sitotoksisitede ve apoptoz süreçlerinde istatistiksel anlamlı sonuçlar elde edilmiştir. Isı şok proteini inhibisyonu ile sinerjetik etki gösteren veriler elde edilmiştir. Sonuç: Sonuç olarak, kombine gruplarda gözlenen artmış hücre ölümü ve apoptoz verisinin tek başına ultrases, pifithrin-μ ve klorin e6 yüklü mikrokabarcık gruplarında görülen etkinin toplamından istatistiksel anlamlı olarak daha fazla olduğu gözlenmiştir. Anahtar kelimeler: Mikrokabarcık, ısı şok protein, sonodinamik terapi, mide kanser	tr_TR
dc.description.tableofcontents	İÇİNDEKİLER KABUL VE ONAY...........................................................................................................i TEŞEKKÜRLER ..............................................................................................................ii İÇİNDEKİLER ................................................................................................................iii SİMGELER VE KISALTMALAR DİZİNİ ....................................................................vi ŞEKİLLER DİZİNİ........................................................................................................viii RESİMLER DİZİNİ........................................................................................................xii TABLOLAR DİZİNİ .....................................................................................................xiii ÖZET..............................................................................................................................xiv ABSTRACT....................................................................................................................xv 1.GİRİŞ .............................................................................................................................1 2.GENEL BİLGİLER .......................................................................................................3 2.1. Kanser ....................................................................................................................3 2.1.1. Mide Kanseri ve İnsidansı...............................................................................6 2.1.2. Kanserde Tedavi Yöntemleri ..........................................................................7 2.2. Heat Shock Proteinleri ...........................................................................................9 2.2.1. Heat Shock Protein 70...................................................................................11 2.2.2. Heat Shock Protein 70’in Kanserlerde Rolü ve İnhibitörler.........................13 2.3. Pifithrin ................................................................................................................17 2.4. Ultrases.................................................................................................................18 2.5. Sonodinamik Terapi.............................................................................................20 2.5.1. Sonodinamik Terapinin Etki Mekanizmaları................................................24 2.6. Sonoduyarlaştırıcılar ............................................................................................27 2.6.1. Klorin e6 .......................................................................................................29 2.7. Mikrokabarcıklar..................................................................................................30 iv 2.7.1. Mikrokabarcık ve Ultrases Etkileşimi...........................................................34 2.7.2. Sonoporasyon................................................................................................37 3.GEREÇ VE YÖNTEM ................................................................................................39 3.1. GEREÇ.................................................................................................................39 3.1.1. Kullanılan Cihazlar .......................................................................................39 3.1.2. Kullanılan Kimyasallar .................................................................................39 3.2. YÖNTEM.............................................................................................................40 3.2.1. Hücre Hattının Temini, Ekimi, Çoğaltılması ve Deney Protokolüne Uygun Hazırlanılması...................................................................................................................40 3.2.2. Kimyasalların Hazırlanması..........................................................................42 3.2.3. Mikrokabarcık Üretimi..................................................................................43 3.2.4. Dinamik Işık Saçılımı Cihazı ile Mikrokabarcık Boyut Analizi...................44 3.2.5. Görüntü İşleme Yöntemi ile Mikrokabarcık Boyut Analizi .........................44 3.2.6. Ultrases Kavitasyon Analizi..........................................................................44 3.2.7. Ultrases Aracılı Mikrokabarcık Yıkımı ........................................................44 3.2.8. Spektroskopik Yöntemler ile Mikrokabarcık İçi Klorin Tayini....................45 3.2.9. Deney Grupları ve Şematize Hali .................................................................46 3.2.10. Hücre Canlılığı Analizi ...............................................................................48 3.2.11. Hoechst Boyama ile Apoptotik Yapıların İncelenmesi...............................49 3.2.12. Western Blot Yöntemi ile Apoptotik Belirteçlerin İncelenmesi.................50 3.2.12.1. Hücrelerden Protein İzolasyonu...........................................................50 3.2.12.2. Bikinkoninik Asit (BCA) ile Protein Miktarı Tayini ...........................52 3.2.12.3. SDS-PAGE Jel Elektroforezi ...............................................................55 3.2.12.4. SDS-PAGE Jel Elektroforezinde Kullanılan Ayırıcı ve Toplayıcı Jelin Hazırlanışı.....................................................................................................................56 3.2.12.5. SDS-PAGE Jel Elektroforezinde Örneklerin Hazırlanması ve Jele Yüklenmesi...................................................................................................................57 3.2.12.6. SDS-PAGE Jelin Membrana Transfer Edilmesi, Blotlama .................59 v 3.2.12.7. Membranın Primer ve Sekonder Antikor ile Muamele Edilmesi ve Görüntüleme .................................................................................................................60 3.2.13. Caspase 3-7 Analizi.....................................................................................63 3.2.14. Annexin V ve Ölü Hücre Analizi................................................................63 3.2.15. Oksidatif Stress Analizi...............................................................................64 3.2.16. İstatistiksel Değerlendirme .........................................................................65 4.BULGULAR................................................................................................................66 4.1. Mikrokabarcık Üretimi ........................................................................................66 4.2. DLS cihazı ile Mikrokabarcık Boyut Analizi ......................................................67 4.3. Görüntü işleme yöntemi ile Mikrokabarcık Boyut Analizi..................................69 4.4. Ultrases kavitasyon analizi...................................................................................70 4.5. Ultrases Aracılı Mikrokabarcık Yıkımı ...............................................................71 4.6. Spektroskopik Yöntemler ile Klorin Analizi .......................................................72 4.8. Hücre Canlılığı Analizi ........................................................................................75 4.9. Hoechst Boyama ile Apoptotik Yapıların İncelenmesi........................................89 4.10. Western Blot Yöntemi ile Apoptotik Belirteçlerin İncelenmesi........................92 4.11. Caspase 3-7 Analizi .........................................................................................101 4.12. Annexin V ve Ölü Hücre Analizi.....................................................................102 4.13. Oksidatif Stress Analizi....................................................................................103 5.TARTIŞMA ...............................................................................................................104 6.SONUÇ VE ÖNERİLER...........................................................................................114 KAYNAKLAR .............................................................................................................116 ÖZ GEÇMİŞ .................................................................................................................124	tr_TR
dc.language.iso	tur	tr_TR
dc.publisher	Adnan Menderes Üniversitesi Sağlık Bilimleri Enstitüsü	tr_TR
dc.rights	info:eu-repo/semantics/embargoedAccess	tr_TR
dc.subject	Mikrokabarcık, ısı şok protein, sonodinamik terapi, mide kanseri	tr_TR
dc.title	MİDE KANSERİ HÜCRELERİNE SONODİNAMİK TERAPİ UYGULAMASINDA HSP 70 İNHİBİSYONU VE KLORİN E6 YÜKLÜ MİKROKABARCIKLARIN ROLÜ	tr_TR
dc.type	doctoralThesis	tr_TR
dc.contributor.authorID	230086	tr_TR
dc.contributor.department	Adnan Menderes Üniversitesi, Sağlık Bilimleri Enstitüsü, Biyofizik (Tıp) Doktora Program	tr_TR