Adipoz Kaynaklı Mezenkimal Kök Hücrelerin İn Vitro Folikülogenez sürecine olan katkısının araştırılması

DSpace Ana Sayfası
→
Tez
→
Yüksek Lisans
→
Öğe Göster

dc.contributor.advisor	GÜMÜŞ, Erkan
dc.contributor.author	DEMİRKAN, Büşra
dc.date.accessioned	2023-09-06T08:07:59Z
dc.date.available	2023-09-06T08:07:59Z
dc.date.issued	2023-09-05
dc.date.submitted	2023-08-04
dc.identifier.uri	http://hdl.handle.net/11607/5074
dc.description.abstract	ADİPOZ KAYNAKLI MEZENKİMAL KÖK HÜCRELERİN İN VİTRO FOLİKÜLOGENEZ SÜRECİNE OLAN KATKILARININ ARAŞTIRILMASI Demirkan B. Sağlık Bilimleri Enstitüsü, Histoloji ve Embriyoloji (Tıp) Programı, Yüksek Lisans Tezi, Aydın, 2023. Amaç: Önerilen bu çalışma ile, adipoz dokudan izole edilen mezenkimal kök hücrelerin dondurulup-çözülmüş ovaryum dokuları ile ko-kültürlerinin in vitro folikülogenez sürecinin verimi ve kalitesi üzerine olan etkilerini incelemeyi amaçlamaktayız. Gereç ve Yöntem: Bu çalışma kapsamında, 8-10 haftalık dişi farelerden AK-MKH’ler izole edilmiştir ve karekterizasyonu yapılmıştır. Ovaryum dokuları 3 haftalık dişi farelerden elde edilmiştir, vitrifikasyon yöntemi ile dondurulup-çözülmüş ve agar pedleri yardımıyla AK-MKH’ler ile beraber yada ayrı ayrı 14 gün 3D ovaryum kültürü yapılmıştır. Kültürün başlangıcından itibaren kültüre alınan foliküller invert mikroskop altında görüntülenerek fotoğraflanmıştır ve folikül çapları ölçülmüştür. Deney sonunda, kontrol ve çalışma gruplarına ait ovaryum doku parçaları histopatolojik açıdan değerlendirilmiştir ayrıca QPCR yöntemi ile Gdf9, Bmp15,Bcl-xl, Bax ve Bcl-2’nin mRNA ekspresyon düzeyleri incelenmiştir. Deneyler sonucunda elde edilen veriler tek yönlü varyans analizi olan (ANOVA) ile GraphPad Prism 8.0.2 kullanılarak değerlendirilmiştir. Bulgular: Deney sonunda vitrifikasyon işlemi uygulanan grupta canlı folikül sayısının azaldığını ancak histolojik olarak değerlendirildiğinde primordiyal ve primer folikül yapısı korunmuştur. Virtifikasyon+ msc(+) grubunda in vitro folikülogenez sürecinin sağlandığı ve sekonder, antral folikül oluşumu mikroskobik olarak izlenmiştir. Kültür sürecinde 6.güne kadar folikül çapı istatistiksel olarak anlamlı derecede artmıştır (P<00.5). Vitrifikasyon+ msc(-) grubunda ise sekonder ve antral folikül gözlemlenmemiştir. Folikül çapı 10.günde anlamlı olarak azalmıştır (P<00.1). Vitrifikasyon+ msc(+)’nin Gdf9, Bmp15’un ekspresyonu vitrifikasyon ve vitrifikasyon+ msc(-)’den yüksektir. Apoptoz belirteçlerine bakıldığında kök hücreden salgılanan sitokinler sayesinde granüloza hücresi ve stromal hücre apoptozunu inhibe etmiştir. Kontrol, virtifikasyon, vitrifikasyon+ msc(-) gruplarının AMH seviyesi vitrifikasyon+ msc(+) grubuna göre daha azdır. Sonuç: Bu çalışmada kültüre alındığında düşük hayatta kalma oranına sahip olan dondurulup-çözülmüş ovaryum dokusunundan elde edilen foliküllerin AK-MKH’lerin ko-külütürünün ovaryum kriyoprezervasyonu sürecinde foliküller üzerinde oluşan etkileri tedavi edeceğini ve hayatta kalma oranlarını arttırabilmektedir.	tr_TR
dc.description.tableofcontents	KABUL VE ONAY i TEŞEKKÜR ii İÇİNDEKİLER iii SİMGELER VE KISALTMALAR DİZİNİ vii ŞEKİLLER DİZİNİ ix RESİMLER DİZİNİ xi TABLOLAR DİZİNİ xiii ÖZET xiv ABSTRACT xvi 1. GİRİŞ ii 1.2. Araştırmanın Amacı 2 2. GENEL BİLGİLER 3 2.1. Ovaryum Embriyolojisi 3 2.2. Ovaryumun Anatomik Yapısı 4 2.3. Ovaryum 8 2.3.1.Ovaryan folliküller ve follikülogenezis 9 2.1.5. Ovulasyon 21 2.1.6. Lüteinizasyon 23 2.2. Fertilitenin korunması için mevcut kullanılan yöntemler 24 2.2.1. Embriyo kriyoprezervasyonu 24 2.2.2. Oosit kriyoprezervasyonu 24 2.2.3. Ovaryum doku kriyoprezervasyonu 25 2.3.Ovaryum ve Oositlerin Dondurulmasında Kullanılan Yöntemler 25 2.3.1. Vitrifikasyon 25 2.4. Slow-freezing (yavaş dondurma) 28 2.5. Ultra-rapid freezing (Ultra hızlı dondurma) 29 2.6. Ovaryum kaynaklı hastalıklarda ve infertil tedavisinde kök hücre 30 2.7. Kemoterapiden kaynaklı infertil hastalarda kök hücre 30 2.8. Kök Hücre 30 2.8.1.Kök hücre biyolojisi 30 2.8.2. Farklılaşabilme potansiyeline göre kök hücreler 31 2.8.3. Mezenkimal kök hücreler 33 2.8.4. Mezenkimal Kök Hücrenin Farklılaşma Yetenekleri 34 2.8.4.2. Adipojenik farklılaşma 35 2.8.5. Adipoz kaynaklı mezenkimal kök hücre izalasyonu 36 2.8.6. Kök hücrelerin folikül gelişimine etkisi 37 2.9. İn vitro folikül kültür modelleri 39 2.9.1. 2 Boyutlu kültür 40 2.9.2. 3 Boyutlu kültür 41 3.1. Etik kurul kararı 42 3.1.1. Kullanılan cihazlar 42 3.1.2. Kullanılan Kimyasal Maddeler 44 3.1.3. Deney Hayvanları 44 3.2. Yöntem 45 3.2.1. Deneysel çalışma 45 3.2.2. Fareden Adipoz Kaynaklı Kök Hücre İzalasyonu 45 3.2.3. Adipoz Kaynaklı Mezenkimal Kök Hücrelerin Pasajlanması 47 3.2.4. Adipoz Kaynaklı Mezenkimal Kök Hücre Karakterizasyonu 48 3.2.4.3.Real-Time PCR (Gerçek Zamanlı Polimer Zincir Reaksiyonu) Analizi 52 3.2.4.3.1 RNA izolasyonu 52 3.2.4.3.2. cDNA Sentezi 53 3.2.4.3.3. RT-PCR 54 3.2.5.Ovaryum Doku Dondurma ve Çözülmesi 56 3.2.5.1.Ovaryumların Vitrifikasyon Yöntemi ile Dondurulması: 56 3.2.5.2.Ovaryumların Çözülmesi 57 3.2.6.Ovaryum doku ve AK-MKH Ko-Kültürü 58 3.2.6.1.Agar pedlerinin hazırlanması 58 3.2.6.2.Aljinatın Hazırlanması 58 3.2.6.3.Kültür medyumunun hazırlanması 59 3.2.7.Doku takibi 61 3.2.7.1. Hematoksilen-Eozin Boyama Protokolü 61 3.2.8. Ovaryum dokularından QPCR ile gen ekspresyonu 62 3.2.8.1. Dokudan RNA İzolasyonu 62 3.2.8.2. cDNA Sentezi 63 3.2.8.3. RT-PCR 63 3.2.10. İstatistiksel değerlendirme 65 4. BULGULAR 66 4.1. Mezenkimal Kök Hücrelerin Karakterizasyonu 66 4.1.1. Mezenkimal Kök Hücrelerin Morfolojik Karakterizasyonu 66 4.1.2. Adipoz Kaynaklı Kök Hücrelerin Diferansiyasyon Potansiyeli 67 4.1.2.1.Adipojenik hücrelerin Oil-red-O boyanması 67 4.1.2.2.Kondrojenik Hücrelerin Alcian Blue Boyaması 68 4.1.2.3.Osteojenik Hücrelerin Alizarin Red Boyaması 69 4.1.3.İmmünfloresan Boyama Sonuçları 69 4.1.4.Kök hücre karakterizasyonu Q-PCR Sonuçları 73 4.2. Ovaryum Dokunun Ko-Kültürü 73 4.3.Ovaryum Dokusunun H&E Boyaması 76 4.3.1. Kontrol Grubuna (Grup 1) ait bulgular 77 4.3.2.Vitrifikasyon Grubuna (Grup 2) Ait Bulgular 79 4.3.2. V+ MSC(+) Grubuna (Grup 3) Ait Bulgular 81 4.3.3. V+ MSC(-) Grubuna (Grup 4 ) Ait Bulgular 83 4.4.Ovaryum Dokusundan Q- PCR 85 4.4.3. Bax mRNA Ekspresyon Düzeyi 87 4.4.4. Bcl2 mRNA Ekspresyon Düzeyi 88 4.4.5. Bcl-xl mRNA Ekspresyon Düzeyi 89 4.5. Ovaryum dokusunda AMH seviyesi 90 5. TARTIŞMA 92 6. SONUÇ VE ÖNERİLER 102 KAYNAKLAR 103 EKLER 122 Ek 1. Deney hayvanları etik kurul onayı 122 BİLİMSEL ETİK BEYANI 123 ÖZ GEÇMİŞ 124	tr_TR
dc.language.iso	tur	tr_TR
dc.publisher	Aydın Adnan Menderes Üniversitesi, Sağlık Bilimleri Enstitüsü	tr_TR
dc.rights	info:eu-repo/semantics/embargoedAccess	tr_TR
dc.subject	3D ovaryum doku kültürü, Adipoz kökenli mezenkimal kök hücre, in vitro folikülogenez, ko-kültür Kriyoprezervasyon,	tr_TR
dc.title	Adipoz Kaynaklı Mezenkimal Kök Hücrelerin İn Vitro Folikülogenez sürecine olan katkısının araştırılması	tr_TR
dc.type	masterThesis	tr_TR
dc.contributor.authorID	10570644	tr_TR
dc.contributor.department	Aydın Adnan Menderes Üniversitesi, Tıp Fakültesi, Histoloji ve Embriyoloji Bölümü	tr_TR