Abstract:
Amaç: Hücre kültüründe çoğaltılan koryokarsinom hücrelerinin PKR aktivasyonu sonucunda proliferasyon, apoptotik özelliklerinin ne şekilde değişeceğini belirmeyi, PKR aktivasyonunun koryokarsinom hücrelerinde kemoterapötik ajan doksorubisine karşı duyarlılığını belirleyerek, kanser tedavisinde kullanabilecek bir alternatif olabileceğini göstermeyi hedeflendi.
Gereç ve Yöntem: Hücre kültürü yöntemiyle koryokarsinom hücreleri çoğatıldı. Hücreler, doksorubisin grubu ve poly I:C/LPS/doksorubisin grubu olarak iki gruba ayrıldı. Doksorubisin farklı dozlarda hücrelere uygulandı. PKR aktivasyonu oluşturmak için ise LPS ve poly I:C hücrelere uygulandı. Ardından gruplar; kontrol, doksorubisin, poly I:C/LPS ve poly I:C/LPS/doksorubisin olarak oluşturuldu ve swan 71 hücreleri üzerine olan etkilerine belirlemek için MTT canlılık testi yapıldı. Flow sitometri yöntemiyle canlılığa, nekroz ve apoptoz yolaklarına bakıldı. Protein izolasyonu metoduyla protein elde edildi. Ardından, bradford deneyi ile elde edilen protein miktarı belirlendi. PKR aktivasyonun tespiti ve PKR aktivasyonunda doksorubisinin etkisini belirlemek için western blot deneyi yapılarak p-PKR bakıldı.
Bulgular: Hücre sayım cihazıyla yapılan deneyde doksorubisinin farklı dozları ile muamele edilen swan 71 hücrelerinde ve PKR aktive edilmiş hücrelerde doksorubisinle birlikte kontrole oranla doza ve zamana bağlı canlılık yüzdesinde konsantrasyon arttıkça istatistiksel olarak anlamlı azalmalar gözlendi. Devamında MTT testi deney grupları değerlendirildi fakat sonuç elde edilemedi. Flow sitometride bu gruplarda canlılık değerlerine bakıldığında ise poly I:C/LPS/dox grubunda ise doksorubisin grubuna göre istatistiksel olarak anlamlı bir artış saptandı. Nekroz yolağında ise, LPS/polyI:C/dox grubunun ise doksorubisin grubun göre nekroz yolağına gittiği görüldü. Apoptoz yolağında, LPS/polyI:C/dox grubunun doksorubisin grubuna göre apoptoza gittiği gözlendi. Son olarak tüm gruplarda p-PKR aktivasyonu western blot analiziyle tespit edildi. PKR aktivasyonunun doksorubisinin duyarlılığını engellediği görüldü.
Sonuç:PKR aktivasyonunun koryokarsinom hücrelerinde bir kemoterapötik ajan olan doksorubisine karşı direnç gösterdiği gözlendi.
