Plasental Trofoblast Hücre Serilerinde PKR Kinaz Aktivasyonun Oksidatif Stres Üzerine Etkisi

Abstract

Amaç: Çalışmada plasenta trofoblast hücrelerine poly(I:C) ve LPS verilerek PKR aktivasyonunu uyarabilme kapasitelerinin olup olmadığı amaçlanmıştır. Plasenta trofoblast hücrelerinde gerçekleşen PKR aktivasyonunun oksidatif stres üzerindeki etkilerinin olup olmadığı ve PKR aktivasyonu ile oksidatif stres arasındaki bağlantının tespitinin yapılması amaçlanmıştır. PKR aktivasyonundan dolayı meydana gelen ROS değişimlerine uygulanan antioksidan maddelerin ROS değişimlerini olan etkisinin tespit edilmesi amaçlanmıştır. Metot: İlk aşamada hücre kültürü yöntemi ile plasental bewo hücre hatları çoğaltıldı. Çalışmada 6 farklı grupluk petri kabında hücreler oluşturuldu. İlk grup kontrol grubu olarak ayrıldı. Dördüncü grup, beşinci grup ve altıncı gruba 50 ul/ml poly(I:C) ve 500 ng/ml LPS verilerek 24 saat inkübasyona bırakıldı. Plasenta trofoblast hücrelerindeki PKR aktivasyonunun tespiti için western blot tekniği uygulandı. Hücrelerde PKR aktivasyonu sonucun da gerçekleşen oksidatif stres belirteçleri ELISA yöntemi ile tespit edildi. İkinci aşamada gruplara antioksidan madde olarak askorbik asit ve glutatyon uygulandı. İkinci gruba 100 uM askorbik asit verildi. Üçüncü gruba 24 uM glutatyon verildi. Beşinci ve altıncı gruplara 100 uM askorbik asit ve 24 uM glutatyon verilerek 24 saat inkübasyona bırakıldı. Antioksidan maddeler verilerek oksidatif stres parametrelerindeki değişimler ELISA yöntemi ile tespit edildi. Hücrelerdeki ROS’ ta meydana değişimler akış sitometresi ile ölçüldü. Bulgular: İlk aşamada hücrelere uygulanan poly(I:C) ve LPS’nin PKR aktivasyonunu gerçekleştiği western blot analizinde tespit edildi. PKR aktivasyonuna bağlı olarak oksidatif stres belirteçlerinde anlamlı değişimler meydana geldi. Gruplara uyguladığımız antioksidan maddeler oksidatif stres belirteç değişimlerini etkiledi. PKR aktivasyonu ROS u arttırırken antioksidan maddeler ROS u azalttı. Sonuç: PKR aktivasyonu oksidatif stresi arttırdı. Uygulanan antioksidan maddeler oksidatif stresi azaltırken PKR aktivasyonun etkilerini de azalttı. Çalışmada PKR aktivasyonu ile oksidatif stresin bağlantılı olduğu ve hücrelerdeki oksidatif stresin PKR aktivasyonuyla ile gerçekleştiğini gösterdi. Anahtar Kelimeler: PKR Aktivasyonu, Oksidatif Stres, ROS, Askorbik Asit, Glutatyon