SUNİTİNİB UYGULANMASININ CAKİ- 1 RENAL KANSER HÜCRELERİ ÜZERİNDEKİ ANTİ- ANJİYOGENİK VE APOPTOTİK ETKİLERİNİN DEĞERLENDİRİLMESİ

DSpace Ana Sayfası
→
Tez
→
Yüksek Lisans
→
Öğe Göster

dc.contributor.advisor	ARAL, Yusuf Ziya
dc.contributor.author	OTU, Bahar
dc.date.accessioned	2024-02-20T11:03:07Z
dc.date.available	2024-02-20T11:03:07Z
dc.date.issued	2024-02-20
dc.date.submitted	2021-10-12
dc.identifier.other	10430800
dc.identifier.uri	http://hdl.handle.net/11607/4571
dc.description.abstract	ÖZET SUNİTİNİB UYGULANMASININ CAKİ- 1 RENAL KANSER HÜCRELERİ ÜZERİNDEKİ ANTİ- ANJİYOGENİK VE APOPTOTİK ETKİLERİNİN DEĞERLENDİRİLMESİ Otu B. Aydın Adnan Menderes Üniversitesi Sağlık Bilimleri Enstitüsü Kök Hücre ve Rejeneratif Tıp Programı, Yüksek Lisans Tezi, Aydın, 2021. Amaç: Bu araştırmanın amacı, sunitinibinin berrak böbrek hücreli karsinom hücreleri olan Caki- 1 hücrelerinin farklı dozlarında anti- anjiyogenik etkilerini araştırmak, hücrelerde olan canlılığına etkilerini görmek ve migrasyona etkilerini saptamaktır. Gereç ve Yöntem: Sunitinib ilacının hücre canlılığına olan etkisi 3- (4, 5- dimetiltiyazol- 2- il) 2,5- difenil tetrazolyum bromür (MTT) ile belirlenmiş olup farklı dozları (0. 5 µM, 1 µM, 2. 5 µM, 5 µM, 10 µM) 24, 48 ve 72 saatlik maruziyet sürelerinde temas ettirilmiştir. Caki-1 hücrelerinde ELISA yöntemi ile VEGF konsantrasyonları saptanmıştır. Migrasyon deneyi ile anjiyogenik etkileri değerlendirilmiştir. Low sitometri ile apoptozun doza bağlı artışı saptanmıştır. Hoechst PI boyaması yapılarak hücre canlılıkları incelenmiştir. Bulgular: Sunitinibin (p<0,05) artan konsantrasyonlarda oluşturduğu sitotoksisitenin doza bağlı olarak anlamlı bir şekilde arttğı tespit edildi. Sunitinib 24, 48 ve 72. saatte 2,5 μM (p<0,001) konsantrasyonda kontrol grubuna göre canlılığı %70’ in altına düştüğü görüldü. Migrasyon deneyinde, hücre kapanma aralığı 24. saatte kontrolde %40,4 iken 2,5 μM konsantrasyonda %2,5 olarak kaydedilmiştir. Muse Cell Analyzer Caspase- 3/ 7 ile yapılan analizde apoptozun konsantrasyon miktarı arttıkça arttığı gözlemlenmiştir. Sonuç: Sunitinibin artan dozuna bağlı olarak Caki- 1 hücre canlılığının azaldığı görülmüştür. Ayrıca, sunitinibin Caki- 1 hücrelerindeki apoptozu arttırdığı gözlemlenmiştir. Anahtar kelimeler: Anjiyogenez, Böbrek Hücreli Karsinoma, Sunitinib, Vasküler Endotelyal Büyüme Faktörü.	tr_TR
dc.description.tableofcontents	İÇİNDEKİLER KABUL VE ONAY i TEŞEKKÜR ii İÇİNDEKİLER iii SİMGELER VE KISALTMALAR DİZİNİ vii ŞEKİLLER DİZİNİ x RESİMLER DİZİNİ xi TABLOLAR DİZİNİ xii ÖZET xiii ABSTRACT xiv 1. GİRİŞ 1 2. GENEL BİLGİLER 3 2.1. Renal Cell Carsinoma (Böbrek Hücreli Karsinom) 3 2.1.2. Böbrek Hücreli Karsinom Tipleri 3 2.1.3. Böbrek Hücreli Karsinom Tedavi Yöntemleri 4 2.1.3.1. Lokal Tedavi 5 2.1.3.2. RCC Tedavisinde Anjiyogenez, Anti- Anjiyogenez ve Tedavi Hedefleri 6 2.1.3.3. RCC Tedavisinde VEGF (Vasküler Endotelyal Büyüme Faktörü)’ nin Rolü 12 2.1.3.4. RCC Tedavisinde Kullanılan Çok Hedefli Tirozin Kinaz İnhibitörleri 14 2.1.3.4.1. Sunitinib 15 2.1.3.5. RCC’ de mTOR (Rapamisin Protein Kompleksinin Memeli Hedefi)’ un Rolü 16 2.2. Hücre Ölüm Mekanizmaları 17 2.2.1. Apoptotik Hücre Ölümü (Programlı Hücre Ölümü) 17 2.2.1.1. Apoptoz Aşamaları 19 2.2.2. Nekrotik Hücre Ölümü (Hasar Yol ile Hücre Ölümü) 20 2.3. Hücre Kültürü Yöntemleri 22 2.3.1. Hücre Kültürü Nedir? 22 2.3.2. Hücre Kültürü Laboratuvarında Gerekli Olan Ekipmanlar 22 2.3.3. Kültür Hazırlıkları 22 2.3.4. Kültür Çeşitleri 23 2.3.4.1. Primer Kültürler 23 2.3.4.2. Sürekli (Kalıcı) Hücre Kültürleri 24 2.3.5. Kültür Teknikleri 25 2.3.5.1. Süspansiyon Kültürler 25 2.3.5.2. Tek Tabakalı (2B) Hücre Kültürü 26 2.3.5.3. Üç Boyutlu (Agrega) Hücre Kültürleri 26 2.3.5.4. Eksplant Hücre Kültürü 30 2.3.6. Hücre Kültürü Avantaj ve Dezavantajları 30 2.4. İn Vitro Sitotoksisite Testleri 31 2.4.1 Boyama Yöntemleri 31 2.4.1.1 Tripan Mavisi 31 2.4.1.2. Eritrosin B 31 2.4.1.3. Kongo Kırmızısı 31 2.4.2. Kolorimetrik yöntemler 32 2.4.2.1. MTT Testi 32 2.7.2. MTT Protokolü 33 2.7.3. Formazan'ın SDS-HCl ile Çözündürülmesi 33 2.7.4. Formazan'ın DMSO ile Çözündürülmesi 34 2.7.5. MTT Stok Çözelti Hazırlanması 34 2.4.2.2. MTS Testi 36 2.4.2.3. XTT ve WST Testleri 36 2.4.2.4. SRB Testi 36 2.4.2.5. LDH Testi 36 2.5. Apoptozisin Belirlenmesinde Kullanılan Yöntemler 37 2.5.1. Hoechst Boyama ve Propidyum İyodür 38 2.5.2. ELISA (Enzyme linked immunosorbent assay) 39 2.5.2.1. Doğrudan (Direkt) ELISA 39 2.5.2.2. Dolaylı (İndirekt) ELISA 40 2.5.2.3. Sandviç ELISA 41 2.5.2.4. Rekabetçi ELISA 42 2.5.3. Caspase 3/ 7 43 2.5.3.1. Muse Cell Analyzer ile Kaspaz-3/7 Aktivasyonu 44 2.6. Hücre Göçü (Migrasyon) 45 3. GEREÇ VE YÖNTEM 48 3.1. Gereç 48 3.1.1. Cihazlar 48 3.1.2. Kullanılan Kimyasal Maddeler 49 3.2. Yöntem 49 3.2.1 Hücre Kültürü İçin Hücre Hattı 49 3.2.2. Hücre Kültürü Medyum Hazırlama 50 3.2.3. Hücre Kültürü İnkübasyon Koşulları 50 3.2.4. Hücrelerin Çözülmesi ve Ekimi 51 3.2.5. Hücrelerin Pasajlanması (Subculturing) 51 3.2.6. Hücrelerin Dondurulma ve Saklanma İşlemleri 52 3.2.7. Hücre Sayılarının Hesaplanması 52 3.2.8. Deney Gruplarında Kullanılan Sunitinibin Doz Ayarlamaları 53 3.2.9. MTT Assay 55 3.2.9.1. MTT Assay İçin Hücre Ekimi ve Sunitinib Çözeltisinin Verilmesi 55 3.2.9.2. MTT Çözeltisinin Hazırlanması 56 3.2.10. Migrasyon Assay 57 3.2.11. Muse Cell Analyzer için Çözelti Hazırlama 58 3.2.12. Hoechst 33342 Boyası ile Boyama 60 3.2.13. ELİSA (Enzyme Linked İmmunosorbent Assay) 60 3.3. İstatistiksel Yöntemler 62 4. BULGULAR 63 4.1. Sunitinibin Caki-1 Hücrelerinde MTT Yöntemi ile Sitotoksisitesinin Değerlendirilmesine İlişkin Bulguları 63 4.1.1. Sunitinibin 24 Saat Maruziyet Süresinde Caki-1 Hücrelerinde MTT Yöntemi ile Sitotoksisitesinin Değerlendirilmesine İlişkin Bulgular 63 4.1.1. Sunitinibin 48 Saat Maruziyet Süresinde Caki-1 Hücrelerinde MTT Yöntemi ile Sitotoksisitesinin Değerlendirilmesine İlişkin Bulgular 66 4.1.1. Sunitinibin 72 Saat Maruziyet Süresinde Caki-1 Hücrelerinde MTT Yöntemi ile Sitotoksisitesinin Değerlendirilmesine İlişkin Bulgular 68 4.2. Sunitinibin Caki-1 Hücrelerinde Migrasyon Yöntemi ile Anjiyogenik ve Anti- Anjiyogenik Etkilerinin Değerlendirilmesine İlişkin Bulgular 72 4.3. Sunitinibin Muse Cell Analyzer (Caspase3/7) ile Apoptotik Etkilerinin Değerlendirilmesine İlişkin Bulgular 75 4.4. Sunitinibin Hücre Canlılığı ve Hücre Ölümüne Dair Etkilerinin Hoechst 33342/ PI Boyası ile Değerlendirilmesine İlişkin Bulgular 78 4.5. Sunitinibin VEGF’ ün Salgılanmasını İnhibe Etmesinin ELİSA Yöntemi ile Değerlendirilmesine İlişkin Bulgular 80 5. TARTIŞMA 82 6. SONUÇ VE ÖNERİLER 85 KAYNAKLAR 86 EKLER 94 BİLİMSEL ETİK BEYANI 94 ÖZ GEÇMİŞ 95	tr_TR
dc.language.iso	tur	tr_TR
dc.rights	info:eu-repo/semantics/openAccess	tr_TR
dc.subject	Anjiyogenez, Böbrek Hücreli Karsinoma, Sunitinib, Vasküler Endotelyal Büyüme Faktörü.	tr_TR
dc.title	SUNİTİNİB UYGULANMASININ CAKİ- 1 RENAL KANSER HÜCRELERİ ÜZERİNDEKİ ANTİ- ANJİYOGENİK VE APOPTOTİK ETKİLERİNİN DEĞERLENDİRİLMESİ	tr_TR
dc.type	masterThesis	tr_TR
dc.contributor.department	Adnan Menderes ÜNİVERSİTESİ Sağlık Bilimleri Enstitüsü Kök Hücre ve Rejeneratif Tıp Bölümü	tr_TR