Servikal Kanser İçin Docetaxel Yüklü Eksozomların Geliştirilmesi ve Terapötik Etkilerinin Belirlenmesi

DSpace Ana Sayfası
→
Tez
→
Yüksek Lisans
→
Öğe Göster

dc.contributor.advisor	Çevik, Özge
dc.contributor.author	Cenik, Melike
dc.date.accessioned	2021-03-11T08:19:40Z
dc.date.available	2021-03-11T08:19:40Z
dc.date.issued	2020
dc.date.submitted	2020-01-18
dc.identifier.uri	http://hdl.handle.net/11607/4001
dc.description.abstract	Serviks kanseri, rahim ağzı kanser olarak bilinir. Bu kanser türünün kadınlarda görülme sıklığı yüksek olmakla birlikte, kanserle ölümler arasında yaygın olarak görülmektedir. Serviks kanseri için kemaoterapiler kullanılmakta ve kombine ilaç tedavileri ile ilgili birçok çalışma bulunmaktadır. Farmasötiklerin nanopartiküller içerisine enkapsülasyonu; kontrollü salım sağlanması, ilaç toksisitesini azaltması ve istenilen bölgeye hedeflendirilebilme özellikleri sayesinde kanser tedavisinde yaşanan problemlere çözüm sunmaktadır. Eksozomlar, hücrelerin kendi yapılarından salınan nano boyuttaki veziküllerdir. Eksozomların, çeşitli hücrelere proteinleri, RNA’ ları, biyomolekülleri transfer edebileceği gösterilmiştir. Eksozomlar ilaç dağıtımı için seri üretilebilir bir kapasiteye sahip olup, tümör büyümesini baskıladığı konusunda da çalışmalar yer almaktadır. Bu tez çalışmasında bir mikrotübül inhibitörü olan kemoterapide kullanılan docetaxel’ in, eksozomlar içerisine yüklenip yeni bir taşıyıcı sistem geliştirilerek, serviks kanseri için terapötik etkileri araştırıldı. Çalışmada serviks kanser hücreleri olan HELA’ dan salınan eksozomlar izole edildi ve eksozomlara elektroporasyon yöntemiyle docetaxel yüklendi. Yükleme yapılan eksozomların karakterizasyon çalışmaları (partikül büyüklüğü, zeta potansiyeli ve enkapsülasyon etkinliği) yapıldı. Sitotoksisitenin belirlenmesi için MTT yöntemi kullanıldı. Uygun doz belirlendikten sonra servikal kanser tedavisi için hücrelere uygulandı. Docataxel yüklü eksozomların migrasyon üzerine etkisi strach testi yapıldı. Apoptoz üzerine etkilerini anlamak için Bax, Bcl-2, Pro kaspaz-3 ve Pro kaspaz-9 proteinlerinin hücre içi ifadeleri Western blot yöntemi kullanılarak saptandı. Gen ifadeleri üzerine etkisi ise RT-PCR yöntemi ile saptandı. Yapılan çalışmalar sonucunda docetaxel yüklü eksozomlar, docetaxel çözeltisine göre daha yüksek sitotoksik etkiye yol açmıştır. Çalışmalar, docetaxel yüklü eksozomların kanser tedavisinde yeni bir yol olabileceğini göstermiştir	tr_TR
dc.description.tableofcontents	KABUL VE ONAY SAYFASI ii TEŞEKKÜR ………………………………………………………………………………….iii İÇİNDEKİLER iv SİMGELER VE KISALTMALAR DİZİNİ vii ŞEKİLLER DİZİNİ x RESİMLER DİZİNİ xii TABLOLAR DİZİNİ xiii ÖZET……………. xiv ABSTRACT…… xv 1. GİRİŞ……. 1 2. GENEL BİLGİLER 4 2.1. Serviks Kanseri 4 2.2. Hastalığın Patogenezi 5 2.3. İnsan Papilloma Virüsü (HPV) 6 2.4. HPV Aracılı Karsinogenez 8 2.5. Rahim Ağzı Kanserinde Güncel Tedaviler 10 2.6. Hücre Dışı Veziküller 14 2.6.1. Apoptotik Cisimler (ApoBD) 15 2.6.2. Mikroveziküller (MV) 17 2.6.3. Eksozomlar 19 2.7. Eksozomların Oluşumu ve Salgılanması 20 2.8. Eksozomların Membran Bileşimleri ve İçeriği 22 2.8.1. Proteinler 23 2.8.2. Lipidler 25 2.8.3. Nükleik Asitler 27 2.9. Eksozomların İzolasyon Yöntemleri 27 2.9.1. Ultrasantrifüj Esaslı İzolasyon Teknikleri 28 2.9.2. Ultrafiltrasyon Yöntemi 30 2.9.3. İmmünoafinite kromatografisi 31 2.9.4. Jel Filtrasyon Kromatografisi 32 2.9.5. Polimer Esaslı Çökeltme Yöntemi 33 2.9.6 Mikroakışkan Esaslı İzolasyon Teknikleri 35 2.10. Eksozomların Fonksiyonları 36 2.11. Eksozomlar ve Kanser 37 2.12. İlaç Taşıyıcı Sistemler Olarak Eksozomlar 39 2.13. Klinik Uygulamalarda Eksozomlar 41 3. GEREÇ ve YÖNTEM 44 3.1. Kullanılan Malzemeler 44 3.2. Kullanılan Cihazlar 44 3.3. Hücre Kültürü 45 3.3.1. Hücrelerin Büyütülüp Çoğaltılması 45 3.3.2. Hücrelerin Pasajlanması ve Dondurulması 45 3.3.4. Hücre Sayımı 46 3.4. Eksozomların İzolasyonu 46 3.5. Eksozomlara Docetaxel (Doc) Yüklenmesi 48 3.6. Eksozomların Boyut ve Karekterizasyonlarının Belirlenmesi 49 3.6.1.Eksozomların Taramalı Elektron Mikroskobunda (SEM) Görüntülemesi 49 3.6.2. Eksozomların Partikül Büyüklüğü ve Zeta Potansiyel Ölçümleri 49 3.6.3 Docetaxelin Eksozomlara Yükleme Etkinliğinin Belirlenmesi 50 3.7 Hücrelere Eksozom Uygulanması 50 3.8. BCA Protein Tayini 51 3.9. MTT Deneyi ile Hücre Canlılığının Saptanması 52 3.10. İlaç Yüklü Eksozomların Migrasyon Üzerine Etkisi 53 3.11. Protein ve Gen Ekspresyon Düzeylerinin Belirlenmesi 54 3.11.1 SDS-PAGE/Western Blot Analizi 54 3.11.1.1. Hücre lizatı elde edilmesi 56 3.11.1.2 Elektroforez 56 3.11.1.3 Transfer işlemi 57 3.11.1.4 Antikor uygulaması ve görüntüleme 57 3.11.2. RNA İzolasyonu ve RT-PCR 57 3.12. Kaspaz-3 Enzim Aktivitesinin İncelenmesi 60 3.13. İstatistiksel Analiz 60 4. BULGULAR 61 4.1. Eksozomların Boyut ve Karakterizasyonları 61 4.2. Enkapsülasyonun Değerlendirilmesine İlişkin Bulgular 62 4.3. Sitotoksisite Çalışmalarına İlişkin Bulgular 63 4.4. Migrasyon Deneyine İlişkin Bulgular 66 4.5. Western Blot Analizi 67 4.6. Kaspaz-3 Enzim Aktivitesi Sonuçları 70 4.7. Q-PCR Bulguları 71 5. TARTIŞMA 74 6. SONUÇ ve ÖNERİLER 81 KAYNAKLAR 82 ÖZGEÇMİŞ…………………………………………………………………………………..97	tr_TR
dc.language.iso	tur	tr_TR
dc.publisher	Adnan Menderes Üniversitesi Sağlık Bilimleri Enstitüsü	tr_TR
dc.rights	info:eu-repo/semantics/openAccess	tr_TR
dc.subject	Eksozom, Serviks kanseri, migrasyon, docetaxel, ilaç taşıyıcı sistem	tr_TR
dc.title	Servikal Kanser İçin Docetaxel Yüklü Eksozomların Geliştirilmesi ve Terapötik Etkilerinin Belirlenmesi	tr_TR
dc.type	masterThesis	tr_TR
dc.contributor.department	Adnan Menderes Üniversitesi, Sağlık Bilimleri Enstitüsü, Moleküler Biyoteknoloji Bölümü	tr_TR