BAKTERİ YÜZEY GÖSTERİM TEKNİĞİ İLE REKOMBİNANT NÜKLEAZ ENZİMİNİN SAFLAŞTIRILMASI

DSpace Ana Sayfası
→
Tez
→
Yüksek Lisans
→
Öğe Göster

dc.contributor.advisor	Başbülbül, Gamze
dc.contributor.author	doğan, yunus
dc.date.accessioned	2020-09-24T13:00:32Z
dc.date.available	2020-09-24T13:00:32Z
dc.date.issued	2020-09-24
dc.date.submitted	2020-08-21
dc.identifier.uri	http://hdl.handle.net/11607/3921
dc.description.abstract	Proteinlerin üretimini kolaylaştırmak ve verimini artırmak için rekombinant teknoloji sürekli geliştirilmektedir. Böylece düşük miktarda üretilen proteinlerin üretimleri artırılabilir ve bunun sonucu olarak maliyetleri düşer. Günümüzde rekombinant protein üretimi için sıklıkla kullanılan tekniklerden biri de gösterim tekniğidir. Gösterim tekniği ile füzyon proteinler hedeflenebilir ve hücre veya bakteriofajın dış yüzey proteinlerine eklenir. Gösterim tekniği yeni protein tasarlamada oldukça kullanışlıdır. Hücre içeriğindeki çeşitli proteinler arasından hedeflenen proteini izole etmek karmaşık bir işlemdir. Bu çalışmada gösterim tekniği, sentezlenen hedef protein streptodornazı saflaştırmada kullanılmıştır. Bu amaçla lpp, ompA ve spd1 genleri için primerler dizayn edilmiş, çoğaltılıp birleştirilen bu genler plazmide aktarılmış ve füzyon protein halinde E. coli’de sentezi sağlanmıştır. Ardından E. coli membranı izole edilmiş ve enterokinaz kesimi ile Spd1 enzimi membrandan ayrılmıştır. Membran proteinleri santrifüjle uzaklaştırıldıktan sonra Spd1 enziminin saflaştırıldığı SDS-PAGE yöntemiyle doğrulanmıştır. Sonuç olarak klinikte kullanım alanı bulunan streptodornaz enziminin bakteri gösterim tekniği ile saflaştırılması ve bu amaçla rekombinant olarak üretilmesi, diğer klasik saflaştırma prosedürlerine kıyasla oldukça hızlı ve düşük maliyette gerçekleştirilmiştir. Tez çalışmamız kapsamında laboratuvarımızda geliştirilen bu yöntem, diğer pek çok hidrofilik, rekombinant protein için de kullanışlı olacaktır.	tr_TR
dc.description.sponsorship	Aydın Adnan Menderes Üniversitesi Bilimsel Araştırma Projeleri Birimi tarafından FEF-19022 proje numarası ile desteklenmiştir.	tr_TR
dc.description.tableofcontents	KABUL VE ONAY SAYFASI ................................................................................................... i TEŞEKKÜR ............................................................................................................................... ii İÇİNDEKİLER ..........................................................................................................................iii SİMGELER DİZİNİ ................................................................................................................... v ŞEKİLLER DİZİNİ ................................................................................................................... vi RESİMLER DİZİNİ ................................................................................................................. vii TABLOLAR DİZİNİ ...............................................................................................................viii ÖZET ......................................................................................................................................... ix ABSTRACT ............................................................................................................................... x 1. GİRİŞ ..................................................................................................................................... 1 2. GENEL BİLGİLER ............................................................................................................... 1 2.1. Gösterim Tekniği ................................................................................................................. 1 2.2. Bakteriyel Gösterimin Kullanım Alanları ........................................................................... 5 2.3. Gösterim Vektörününde Kullanılacak Proteinler ................................................................ 7 2.3.1. Lipoprotein ........................................................................................................................ 7 2.3.2. Dış Membran Proteini A (OmpA)..................................................................................... 7 2.3.3. Streptodornaz .................................................................................................................... 9 3. GEREÇ VE YÖNTEM ........................................................................................................ 11 3.1. Gereç.................................................................................................................................. 11 3.1.1. Bakteri Suşları ................................................................................................................. 11 3.1.2. Kullanılan Plazmidler...................................................................................................... 12 3.1.3. Kullanılan Besiyerleri Ve Çözeltiler ............................................................................... 12 3.2. Yöntem .............................................................................................................................. 14 3.2.1. Primer Tasarımı ............................................................................................................... 14 3.2.2. Lpp, OmpA ve Spd1 Gen Dizilerinin PCR ile Çoğaltılması ........................................... 17 3.2.3. Lpp-OmpA Gen Dizilerinin Füzyonu ve Gösterim Vektörünün Oluşturulması ............. 18 3.2.4. Gösterim Vektörünün Transformasyonu......................................................................... 20 3.2.5. Spd1 Gen Dizisinin Gösterim Vektörüne Klonlanması .................................................. 20 3.2.6. Spd1 Enziminin Aktivitesinin Belirlenmesi ................................................................... 21 3.2.7. Spd1 Enziminin Hasadı ................................................................................................... 21 4. BULGULAR ........................................................................................................................ 23 iv 5. TARTIŞMA ......................................................................................................................... 31 6. SONUÇ ve ÖNERİLER ...................................................................................................... 34 KAYNAKLAR ......................................................................................................................... 35 ÖZGEÇMİŞ .............................................................................................................................. 39	tr_TR
dc.language.iso	tur	tr_TR
dc.rights	info:eu-repo/semantics/openAccess	tr_TR
dc.subject	Bakteri gösterimi, Lpp-OmpA, streptodornaz	tr_TR
dc.title	BAKTERİ YÜZEY GÖSTERİM TEKNİĞİ İLE REKOMBİNANT NÜKLEAZ ENZİMİNİN SAFLAŞTIRILMASI	tr_TR
dc.title.alternative	NUCLEASE ENZYME PURIFICATION BY BACTERIAL SURFACE DISPLAY TECHNIQUE	tr_TR
dc.type	masterThesis	tr_TR
dc.contributor.authorID	0000-0002-9587-8400	tr_TR
dc.contributor.department	Aydın Adnan Menderes Üniversitesi, Sağlık Bilimleri Enstitüsü, Moleküler Biyoteknoloji Anabilim Dalı (Disiplinlerarası), Moleküler Biyoteknoloji	tr_TR