PROSTAT KANSERİ HÜCRE DİZİNİNDE FOTODİNAMİK VE SONODİNAMİK TEDAVİLERİN ETKİSİ

DSpace Ana Sayfası
→
Tez
→
Doktora
→
Öğe Göster

dc.contributor.advisor	Bilgin, Mehmet Dinçer
dc.contributor.author	Aksel, Mehran
dc.date.accessioned	2019-11-25T06:24:11Z
dc.date.available	2019-11-25T06:24:11Z
dc.date.issued	2019-11-25
dc.date.submitted	2019-11-16
dc.identifier.uri	http://hdl.handle.net/11607/3663
dc.description.abstract	Bu çalışmanın amacı, prostat kanseri tedavisinde metilen mavisi veya fiyorbid a-aracılı sonodinamik, fotodinamik ve sonofotodinamik tedavilerin olası antitümör etkilerinin ve etki mekanizmalarının in vitro incelenmesidir. Sonodinamik ve sonofotodinamik tedaviler yeni tür noninvaziv yöntemler olup kanser tedavisinde önemli bir yere sahip olacağı düşünülmektedir. Bu bağlamda, tedavilerin hücre canlılığı üzerine etkileri MTT testi ile apoptotik morfolojik değişimler hoechst/propidiyum iyodid boyamayla, apoptotik yolakta ve wnt sinyal yolağında bulunan proteinlerin miktarları western blot yöntemiyle ve bu yolaklardaki proteinlerin gen düzeyindeki ekspresyonlarına etkileri RT-PCR analizi ile incelenmiştir. Ayrıca, tedavi sonrası hücrelerdeki reaktif oksijen türlerinin miktarı ile antioksidan sistemlerdeki değişimler biyokimyasal yöntemlerle incelenmiştir. Sonuçlara göre tek başına ışık veya ultrases uygulamasının kontrole nazaran hücre canlılığına etkisi yokken, uygulanan tedavilerin hücre canlılığını azalttığı belirlenmiştir. Ayrıca, kontrol hücrelerine nazaran tedavi gruplarında apoptotik hücrelerin sayısının önemli oranlarda arttığı gözlenmiştir. Uygulanan tedavilerin hücrelerde kaspaz-8, kaspaz-3, Parp ve Bax proteinlerinin seviyelerinde artışa, kaspaz-9 ve bcl2 protein seviyelerinde azalmalara yol açtığı gözlenmiştir. RT-PCR sonuçlarına göre wnt sinyal yolağındaki proteinlerin gen düzeyinde ekspresyonlarının uygulanan tedavilerle değiştiği gözlenmiştir. Ayrıca, uygulanan tedavilerin prostat kanser hücrelerinde ROS ve MDA seviyelerinde artış, GSH, CAT ve SOD seviyelerinde azalmaya neden olduğu tespit edilmiştir. Sonuç olarak prostat kanseri tedavisinde sonodinamik, fotodinamik ve sonofotodinamik tedavilerin umut verici etkilere sahip olduğu ve bu etkilerin hücre içi ROS miktarı ile indüklenen apoptoz ve wnt yolağı ile ilişkili olabileceği gösterilmiştir.	tr_TR
dc.description.sponsorship	TUBİTAK-SBAG 114S491 proje numarası ile ve Aydın Adnan Menderes Üniversitesi Bilimsel Araştırma Projeleri Birimi proje numarası TPF-15068.	tr_TR
dc.description.tableofcontents	KABUL VE ONAY SAYFASI ................................................................................................... i TEŞEKKÜR ............................................................................................................................... ii İÇİNDEKİLER .......................................................................................................................... iii SİMGELER ve KISALTMALAR DİZİNİ ................................................................................ v ŞEKİLLER DİZİNİ .................................................................................................................. vii TABLOLAR DİZİNİ ................................................................................................................ ix ÖZET .......................................................................................................................................... x ABSTRACT .............................................................................................................................. xi 1. GİRİŞ ..................................................................................................................................... 1 2. GENEL BİLGİLER ................................................................................................................ 3 2.1. Prostat Kanseri .................................................................................................................... 3 2.1.1. Prostat Anatomisi ............................................................................................................. 3 2.1.2. Prostat Kanseri Epidemiyolojisi ve Etiyolojisi ................................................................ 4 2.1.3. Prostat Kanserinde Tanı ................................................................................................... 6 2.1.4. Prostat Kanserinin Gelişimi ve Prostat Kanserinde Sinyal Yolakları .............................. 8 2.1.5. Wnt Sinyal İletisinde Rol Oynayan Başlıca Proteinler .................................................. 12 2.1.5.1. Wnt proteinleri ............................................................................................................ 12 2.1.5.2. Frizzled proteinleri ...................................................................................................... 13 2.1.5.3. Lipoprotein ilişkili reseptör proteinler ....................................................................... 13 2.1.5.4. Axin ............................................................................................................................. 13 2.1.5.5. β- katenin ..................................................................................................................... 14 2.1.5.6. Adenomatosis polyposis coli ....................................................................................... 14 2.1.5.7. T hücre faktörü/lenfoid arttırıcı faktör ........................................................................ 15 2.1.5.8. Glikojen sentaz kinaz 3 ............................................................................................... 15 2.1.5.9. Dishevelled .................................................................................................................. 16 2.1.5.10. Wnt sinyali ile apoptozun ilişkisi .............................................................................. 16 2.1.6. Prostat Kanserinde Tedavi Yöntemleri .......................................................................... 17 2.2. Fotodinamik ve Sonodinamik Tedaviler ........................................................................... 18 2.2.1. Fotodinamik Tedavi ....................................................................................................... 18 2.2.2. Fotodinamik Tedavinin Tarihçesi .................................................................................. 20 2.2.3. Fotodinamik Tedavide Kullanılan Işık Kaynakları ........................................................ 22 2.2.4. Sonodinamik Tedavi ...................................................................................................... 23 2.2.5. Sonodinamik Tedavinin Tarihçesi ................................................................................. 26 2.2.6. Fotodinamik ve Sonodinamik Tedavide Kullanılan Ajanlar .......................................... 27 2.2.6.1. Porfirin ve türevleri ..................................................................................................... 29 2.2.6.2. Porfirin olmayan ajanlar .............................................................................................. 32 2.2.7. Fotodinamik Terapinin Kanser Tedavisinde Kullanımı ................................................. 33 2.2.8. Sonodinamik Terapinin Kanser Tedavisinde Kullanımı ................................................ 35 2.2.9. Fotodinamik ve Sonodinamik Terapide Hücre Ölümü Mekanizmaları ......................... 36 3. GEREÇ ve YÖNTEM .......................................................................................................... 39 3.1. Hücre Kültürü Yöntemi ..................................................................................................... 39 iv 3.1.1. Hücre Kültüründe Kullanılan Hücre Hatları .................................................................. 41 3.1.2. Besiyerinin Hazırlanması ve Hücrelerin Çoğaltılması ................................................... 41 3.1.3. Hücrelerin Dondurulması ve Çözdürülmesi ................................................................... 42 3.1.4. Hücre Sayımı ve Deney Düzeneğinin Kurulması .......................................................... 42 3.1.5. Fotosensitif/Sonosensitif Ajanların Uygulanması .......................................................... 43 3.1.6. Işık ve Ultrases Uygulamaları ........................................................................................ 44 3.2. Ölçüm ve Değerlendirmeler .............................................................................................. 46 3.2.1. Hücre Canlılığı Testleri .................................................................................................. 46 3.2.2. Apoptoz ve Nekroz Tayini ............................................................................................. 46 3.2.3. Western Blot yöntemi ..................................................................................................... 47 3.2.3.1. Hücre lizatının hazırlanması ve uygulanması ............................................................. 47 3.2.3.2. SDS-PAGE elektroforez ............................................................................................. 48 3.2.3.3. Jelin membrana transfer edilmesi ................................................................................ 50 3.2.3.4. Görüntüleme ................................................................................................................ 52 3.2.4. RNA izolasyonu ve RT-PCR ......................................................................................... 53 3.2.4.1. Hücre hatlarından total RNA izolasyonu .................................................................... 53 3.2.4.2. cDNA sentezi .............................................................................................................. 54 3.2.4.3. RT-PCR protokolü ...................................................................................................... 55 3.2.5. Biyokimyasal Ölçümler .................................................................................................. 56 3.2.5.1. Reaktif oksijen türleri miktarının ölçümü ................................................................... 56 3.2.5.2. Süperoksit dismutaz aktivitesinin belirlenmesi ........................................................... 57 3.2.5.3. İndirgenmiş glutatyon ölçümü .................................................................................... 58 3.2.5.4. Malondialdehit ölçümü ............................................................................................... 59 3.2.5.5. Katalaz aktivitesi ölçümü ............................................................................................ 60 3.2.6. İstatistiksel Analiz .......................................................................................................... 60 4. BULGULAR ........................................................................................................................ 61 4.1. PCa Hücre Dizinlerinde Sonosensitif/Fotosensitif Ajanların Tek Başına Etkinliği.......... 61 4.2. PC3 ve LNCaP Hücre Dizinlerinde Işık ve Ultrasesin Tek Başına Etkinliği ................... 62 4.3. PCa Hücre Dizinlerine Sonodinamik Tedavi Uygulanması .............................................. 64 4.4. PCa Hücre Dizinlerine Fotodinamik Tedavi Uygulanması ............................................... 66 4.5. PC3 ve LNCaP Hücrelerine Sonofotodinamik Tedavilerin Etkisi .................................... 67 4.6. PC3 ve LNCaP Hücre Dizinlerinde Apoptoz ve Nekroz Tayini Sonuçları ...................... 70 4.6.1. PHa-Aracılı Tedavilerin Prostat Kanseri Hücre Dizinlerine Apoptotik Etkileri ............ 70 4.6.2. MB-Aracılı Tedavilerin Prostat Kanseri Hücre Dizinlerine Apoptotik Etkileri ............ 73 4.7. PCa Hücre Dizilerinde Tedavi Sonrası Western Blot Sonuçları ....................................... 76 4.8. PCa Hücre Dizilerinde Tedavi Sonrası Wnt Sinyal Yolağı Gen İfade Seviyeleri ............ 80 4.9. Prostat Kanseri Hücre Dizilerinde Tedavi Sonrası Biyokimyasal Analizler .................... 84 5. TARTIŞMA ......................................................................................................................... 86 6. SONUÇLAR ve ÖNERİLER ............................................................................................... 95 KAYNAKLAR ......................................................................................................................... 97 EKLER ................................................................................................................................... 115 ÖZGEÇMİŞ ........................................................................................................................... 116	tr_TR
dc.language.iso	tur	tr_TR
dc.rights	info:eu-repo/semantics/restrictedAccess	tr_TR
dc.subject	Fotodinamik Tedavi, Fiyorbid a, Metilen Mavisi, Prostat Kanseri, Sonodinamik Tedavi.	tr_TR
dc.title	PROSTAT KANSERİ HÜCRE DİZİNİNDE FOTODİNAMİK VE SONODİNAMİK TEDAVİLERİN ETKİSİ	tr_TR
dc.type	project	tr_TR
dc.contributor.authorID	15348	tr_TR
dc.contributor.department	Adnan Menderes Üniversitesi, Tıp Fakültesi, Biyofizik Anabilim Dalı	tr_TR