PROTEİN KİNAZ RNA (PKR) İNHİBİTÖRLERİN ENDOPLAZMİK RETİKULUM (ER) STRES GEÇİREN PANKREAS HÜCRELERİNDE İNSÜLİN SALINIMI ÜZERİNE ETKİLERİ

DSpace Ana Sayfası
→
Tez
→
Yüksek Lisans
→
Öğe Göster

dc.contributor.advisor	Yalçın, Abdullah
dc.contributor.author	Şarkıcı, Gülçin
dc.date.accessioned	2019-09-03T08:53:18Z
dc.date.available	2019-09-03T08:53:18Z
dc.date.issued	2019-09-03
dc.date.submitted	2019-08-02
dc.identifier.uri	http://hdl.handle.net/11607/3611
dc.description	Aydın Adnan Menderes Üniversitesi Bilimsel Araştırma Projeleri Birimi tarafından TPF-170559 proje numarası ile desteklenmiştir.	tr_TR
dc.description.abstract	Tip 2 diyabet dünyada milyonlarca kişiyi olumsuz etkileyen ve vücutta çeşitli mikro ve makro vasküler komplikasyonlara neden olan bir hastalıktır. Son yıllarda tip 2 diyabetin prevalansının gelişmiş ve gelişmekte olan ülkelerde önemli ölçüde artması, hastalığı toplum sağlığını tehdit eden en önemli tehlikelerden biri konumuna getirmiştir. Pankreastaki beta hücrelerinin dejenerasyonu ve bunun sonucunda salgılanan insülin miktarının ihtiyacı karşılayamayarak hiperglisemiye neden olması hastalığın ileriki safhalarında sıklıkla görülür. Beta hücrelerinin dejenerasyonunda Endoplazmik retikulum (ER) stresinin katkısı kabul edilen bir durumdur. PKR stres kinazın diyabet gelişimine negatif katkı yapar ve artan PKR aktivitesinin insülin salınmasında azalmasına yol açmaktadır. Bu çalışmanın amacı ER stres koşullarında in vitro olarak kültüre edilmiş pankreatik beta hücrelerinde PKR inhibitörleri kullanılarak insülin salınımı ve ER stres belirteçlerinin gösterilmesidir. PKR benzeri kinaz PERK/elF2'nıninsülin salınmasında azalmasında sebep olduğu bilinmektedir. PKR inhibitörlerin ER stresine maruz kalmış P-elF2- İfadesinin Beta Hücrelerinde Protein Düzeyinde Belirlenmesinde ER belirteçlerini tespit etmek için western blot ve qPCR analizi yapılmıştır. Diğer bir deney ise hücre içi konstrasyonundaki insülin miktarını tespit etmek için ELİSA testi yapılmıştır. Yapılan bu tez çalışmasında PKR inhibitörleri ve ER stresine maruz kalması sonucu insülin miktarında artışlar olduğu gözlemlenmiştir ve en yüksek artışı gösteren PKR inhibatörü İmoxin ( Tunicamycin yok) olmuştur. Aynı zamanda ER strese maruz kalmış beta hücrelerinde insülin salınımı PKR inhibatörlerinden etkilenmemektedir. Buna rağmen insülin salınımında artış gözlemlenmiştir. Bu çalışma tip 2 diyabette ER stresine maruz kalmış hücrelerde insülin salınımının olumsuz yönde etkilendiğini ve ER stresini engelleyen terapilerin insülin salınımına olumlu katkıları olduğunu işaret etmektedir.	tr_TR
dc.description.sponsorship	BAP	tr_TR
dc.description.tableofcontents	KABUL VE ONAY SAYFASI i TEŞEKKÜR ii İÇİNDEKİLER iii SİMGELER VE KISALTMALAR DİZİNİ vi ŞEKİLLER DİZİNİ vii TABLOLAR DİZİNİ viii ÖZET ix ABSTRACT x 1.GİRİŞ 1 2. GENEL BİLGİLER 3 2.1. Enerji Metabolizmasının Kontrolü 3 2.1.1. Glukoz Metabolizması 3 2.2. Diyabet 5 2.2.1. Diyabet Tarihçesi 5 2.2.2. Diyabet Sınıflandırılması 6 2.3. Diyabet Komplikasyonları 7 2.4. Diyabetes Mellitusun İnsidansı ve Epîdemiyolojisi 7 2.4.1. Tip 2 Diabetes Mellitus Etyopatogenez 8 2.5. Pankreas Fizyolojisi 8 2.5.1. Pankreatik Beta Hücrelerinin Fizyolojisi 9 2.5.2. Diyabet ve Beta Hücre Apoptozisi 11 2.5.3. İnsülin ve Etkisi 12 2.5.4. İnsülin Salınımın Kontrolü 13 2.5.5. İnsülin Sinyal İletimi 14 2.6. Endoplazmik Retikulum 15 2.6.1. Granüllü Endoplazmik Retikulum 16 2.6.2. Granülsüz Endoplazmik Retikulum 18 2.7. Endoplazmik Retikulum Stresi 19 2.7.1. PKR 21 2.7.2. Metabolizmada PKR'nın Rolü 26 2.8. UPR Sinyal Yolakları 28 2.8.1. Endoplazmik Retikulum Stres Yolları 28 2.8.2. IRE1 Sinyal Yolu 30 2.8.3. ATF6 Sinyal Yolu 30 2.8.4. PERK Sinyal Yolağı 31 3. GEREÇ VE YÖNTEMLER 33 3.1. Kullanılan Hücre Dizileri 33 3.1.1. Kullanılan Besiyerleri ve Kimyasallar 33 3.1.2. Kullanılan Antikorlar ve Oligolar 34 3.1.3. Kullanılan Sarf Malzemeler 34 3.1.4. Kullanılan Alet ve Cihazlar 35 3.2. Yöntem 35 3.2.1. Hücre Kültürü Çalışmaları 35 3.2.2. Hücrelerin Dondurulup Saklanma İşlemi Dondurma Besiyeri İçeriği 36 3.2.3. Hücrelerin Çözdürülüp Kullanılması 36 3.2.4. Diyabetik İlaç Stoklarının Hazırlanması 37 3.2.5. Hücre Kültürü Çalışmalarını ve Sonrasında Yapılacak Olan Analizlerin Hazırlanması 37 3.2.5.1. PKR inhibatörlerin 24 saat boyunca hücrelere muamele edilmesi 38 3.2.5.2. Beta hücrelerinde ER stres tunicamycin indüklendiği hücre kültürü çalışmalarının hazırlanışı 38 3.2.5.3. 16 saatte glukozsuz medyum ile sonrasında yüksek glukoza maruz bırakılan hücre kültürü çalışmalarının hazırlanışı 38 3.2.2.4. Lizat yönteminin uygulanması 38 3.3. ELİSA Testi 39 3.4. Protein İzolasyonu ve Protein Tayini 40 3.5. Protein Tayini 41 3.6. Western Blot analizi 42 3.7. RNA İzolasyonu 45 3.8. cDNA (komplementer) Sentezi 46 3.9. qPCR Aşaması 47 4. BULGULAR 49 4.1. P-elF2- İfadesinin Beta Hücrelerinde Protein Düzeyinde Belirlenmesi 49 4.2. Beta Hücrelerinde Spliced Xbp-1 (sXbp-1) mRNA İfadeleri 51 4.3. Beta Hücrelerinde İnsülin Konsantrasyonları 53 5. TARTIŞMA 56 6. SONUÇ VE ÖNERİLER 59 KAYNAKLAR 61 ÖZGEÇMİŞ 73	tr_TR
dc.language.iso	tur	tr_TR
dc.rights	info:eu-repo/semantics/closedAccess	tr_TR
dc.subject	ER Stres, İnsülin, PERK/ Elf2, PKR, PKR İnhibitörü, Tip 2 Diyabet.	tr_TR
dc.title	PROTEİN KİNAZ RNA (PKR) İNHİBİTÖRLERİN ENDOPLAZMİK RETİKULUM (ER) STRES GEÇİREN PANKREAS HÜCRELERİNDE İNSÜLİN SALINIMI ÜZERİNE ETKİLERİ	tr_TR
dc.type	masterThesis	tr_TR
dc.contributor.department	Aydın Adnan Menderes Üniversitesi, Sağlık bilimleri Enstitüsü. Tıbbi biyoloji	tr_TR