dc.contributor.advisor |
Karagenç, Levent |
|
dc.contributor.author |
Doğan, Göksel |
|
dc.date.accessioned |
2019-07-22T12:25:17Z |
|
dc.date.available |
2019-07-22T12:25:17Z |
|
dc.date.issued |
2019 |
|
dc.date.submitted |
2019-06-21 |
|
dc.identifier.uri |
http://hdl.handle.net/11607/3566 |
|
dc.description.abstract |
ÖZET
FARELERDE IN VITRO EMBRİYO KÜLTÜRÜ VE EMBRİYO TRANSFERİNİN
FÖTAL AKCİĞER DOKUSUNDA NOTCH SİNYAL YOLAĞI HEDEF
GENLERİNDEN HEY1 VE SKP2 GENLERİNİN EKSPRESYONU ÜZERİNE ETKİSİ
Doğan G. Aydın Adnan Menderes Üniversitesi Sağlık Bilimleri Enstitüsü HistolojiEmbriyoloji Doktora Programı (Veteriner) Doktora Tezi, Aydın, 2019.
Sunulan tez çalışmasında, in vitro embriyo kültürü ve embriyo transferi işlemlerinin fötal
(E18.5) akciğer dokusunda Notch sinyal yolağı hedef genlerinden Hey1 ve Skp2 genlerinin
ekspresyonu üzerine herhangi bir etkisinin olup olmadığının incelenmesi amaçlanmıştır.
Çalışmada bir Kontrol grubu ve bir Deneme grubuna yer verilmiştir. Kontrol grubunu
oluşturan fötal akciğer doku örnekleri, PMSG+hCG uygulaması yapılmamış olan dişilerin,
aynı yaştaki erkeklerle çiftleştirilmelerinden elde edilen fötuslardan; Deneme grubunu
oluşturan fötal akciğer doku örnekleri ise PMSG+hCG uygulamasını takiben çiftleştirilen
dişilerden elde edilen döllenmiş yumurta hücrelerinin (zigot) atmosferik oksijen
konsantrasyonunda büyütülmesiyle elde edilen blastosistlerin yalancı gebelere transferi
sonucunda elde edilen fötuslardan izole edilmiştir. Akciğer dokularında, Hey1 ve Skp2
proteinlerinin ekspresyonlarını belirlemek amacıyla immunohistokimya/immunofloresan
boyama teknikleri uygulanmıştır. Hey1 ve Skp2 genlerinin transkripsiyonel ve translasyonel
düzeylerde ekspresyonlarının belirlenmesinde kantitatif real-time PCR (qRT-PCR) ve western
blot yöntemlerinden yararlanılmıştır. İmmunohistokimya/immunofloresan boyama sonuçları,
Kontrol ve Deneme gruplarına ait akciğer dokularında Hey1 ve Skp2 proteinlerinin benzer bir
ekspresyon profiline sahip olduklarını göstermiştir. Birleştirilmiş total RNA örneklerinde
TaqMan probları kullanılarak gerçekleştirilen qRT-PCR analizlerinden elde edilen sonuçlar,
Kontrol grubu ile kıyaslandığında, Deneme grubunda Hey1 mRNA ekspresyonunun 3,30 kat
azaldığını; Skp2 mRNA ekspresyonunun ise 8,53 kat arttığını göstermiştir. Aynı örneklerde,
SYBR Green metodu ile gerçekleştirilen qRT-PCR analizleri, Hey1 mRNA ekspresyonunun
4,39 kat azaldığını; Skp2 mRNA ekspresyonunun ise 10,57 kat arttığını göstermiştir. Ayrıca,
SYBR green qRT-PCR yöntemi ile bireysel örneklerde yapılan analizler, Kontrol grubu ile
kıyaslandığında Deneme grubunda Hey1 mRNA ekspresyonunun 3,88 kat azaldığını; Skp2
mRNA ekspresyonunun ise 7,57 kat arttığını göstermiştir. Western blot analizleri, Kontrol
xii
grubu ile kıyaslandığında, Deneme grubunda Skp2 proteininin ekspresyon düzeyinin 2,34 kat
arttığını; istatistiksel olarak anlamlı olmamakla birlikte Hey1 proteininin 1,17 kat azaldığını
göstermiştir. Elde edilen veriler, Hey1 ve Skp2’nin farelerde fötal akciğer dokusunda belirli
hücreler tarafından eksprese edildiğini göstermekte olup, in vitro embriyo kültürü ve embriyo
transferi işlemlerinin Hey1 ve Skp2’nin transkripsiyonel/translasyonel ekspresyonlarını
değiştirerek fötal akciğer dokusunun gelişimini etkiliyebileceğini düşündürmektedir. |
tr_TR |
dc.description.tableofcontents |
İÇİNDEKİLER
KABUL VE ONAY SAYFASI...................................................................................................i
TEŞEKKÜR ...............................................................................................................................ii
İÇİNDEKİLER..........................................................................................................................iii
SİMGELER VE KISALTMALAR DİZİNİ...............................................................................v
ŞEKİLLER DİZİNİ..................................................................................................................vii
TABLOLAR DİZİNİ..................................................................................................................x
ÖZET.........................................................................................................................................xi
ABSTRACT ............................................................................................................................xiii
1. GİRİŞ......................................................................................................................................1
2. GENEL BİLGİLER................................................................................................................3
2.1. Farelerde Akciğer Gelişimi .................................................................................................3
2.2. Farelerde Akciğer Dokusunun Gelişim Aşamaları..............................................................5
2.2.1. Psödoglandüler Evre.........................................................................................................6
2.2.2. Kanaliküler Evre…………………………………………………………..…………….9
2.2.3. Sakküler Evre (terminal kese evresi)................................................................................9
2.2.4. Alveolar Evre..................................................................................................................10
2.3. Akciğer Gelişiminde Notch Sinyal Yolağı........................................................................11
2.3.1. Notch Sinyal Yolağı .......................................................................................................11
2.3.2. Proksimal Akciğerde Notch Sinyal Yolağı’nın Rolü .....................................................13
2.3.3. Alveolar Gelişimde Notch Sinyal Yolağının Rolü.........................................................15
2.4. Notch Sinyal Yolağı Hedef Genleri...................................................................................17
2.4.1. Notch Sinyal Yolağı Hedef Genlerinden Hey1 ..............................................................19
2.4.2. Notch Sinyal Yolağı Hedef Genlerinden Skp2...............................................................21
2.5. Üremeye Yardımcı Tedavi (ÜYTE) Yöntemleri...............................................................24
2.6. ÜYTE Yöntemlerinin Uygulanmasına Bağlı Olarak Ortaya Çıkan Sağlık Sorunları.......25
3. GEREÇ VE YÖNTEM.........................................................................................................29
3.1. Gereç..................................................................................................................................29
3.1.1. Çalışma Materyali ..........................................................................................................29
3.2. Yöntem ..............................................................................................................................31
iv
3.2.1. Hematoksilen-Eozin Boyama Metodu............................................................................31
3.2.2. İmmunohistokimyasal Boyama Metodu.........................................................................31
3.2.3. İmmunofloresan Boyama Metodu..................................................................................32
3.2.4. Western Blot Metodu .....................................................................................................33
3.2.5. Total RNA İzolasyonu....................................................................................................37
3.2.6. Real-Time PCR (qRT-PCR)...........................................................................................37
3.2.6.1. cDNA (komplementer DNA) sentezi…………...……………………………………37
3.2.6.2. TaqMan metodu ile kantitatif real-time PCR (qRT-PCR) analizi………………...…39
3.2.6.3. SYBR green metodu ile kantitatif real-time PCR (qRT-PCR) analizi………………41
3.2.7. İstatistiksel analizler…………………………………………………………………....43
4. BULGULAR……………………………………………………………………...………..44
4.1. Fötal Akciğer Dokusunun Genel Histolojik Yapısı...........................................................44
4.2. Fötal Akciğer Doku Örneklerinde İmmunohistokimya ve İmmunofloresan
Boyama Yöntemiyle Hey1 ve Skp2 Ekspresyonunun Belirlenmesi.................................45
4.3. Fötal Akciğer Doku Örneklerinde Western Blot Tekniğiyle
Hey1 ve Skp2 Ekspresyonlarının Belirlenmesi ................................................................49
4.4. Fötal Akciğer Doku Örneklerinden İzole Edilen Total RNA Örneklerinin Kalitesi.........52
4.5. Fötal Akciğer Doku Örneklerinde Real-Time PCR Tekniğiyle
Hey1 ve Skp2 Ekspresyonlarının Belirlenmesi ................................................................54
4.6. Bireysel Fötal Akciğer Doku Örneklerinde Hey1 ve Skp2
Ekspresyonlarının Belirlenmesi.........................................................................................64
5. TARTIŞMA..........................................................................................................................67
6. SONUÇLAR VE ÖNERİLER .............................................................................................78
KAYNAKLAR.........................................................................................................................79
EKLER ...................................................................................................................................102
Ek 1. ÜYTE alanında sağlanan teknolojik ilerlemenin kronolojik bir tarihçesi ....................102
Ek 2. Üremeye yardımcı tedavi (ÜYTE) yöntemleri ve tanımları .........................................106
Ek 3. Araştırmada kullanılan solüsyon ve kimyasallar ..........................................................107
Ek 4. Western Blot yönteminde kullanılan solüsyonlar ve Western Blot tekniği..................108
Ek 5. c-DNA Sentezi ve materyalleri .....................................................................................113
Ek 6. RT- PCR solüsyonları ve materyalleri ..........................................................................115
Ek 7. Etik Kurul Raporu.........................................................................................................117
ÖZGEÇMİŞ............................................................................................................................119 |
tr_TR |
dc.language.iso |
tur |
tr_TR |
dc.publisher |
Adnan Menderes Üniversitesi Sağlık Bilimleri Enstitüsü Histoloji ve Embriyoloji (Veteriner) Anabilim Dalı Doktora Programı |
tr_TR |
dc.rights |
info:eu-repo/semantics/embargoedAccess |
tr_TR |
dc.subject |
Fare fötal akciğer dokusu, Hey1, in vitro embriyo kültürü ve embriyo transferi, Notch sinyal yolağı, Skp2. |
tr_TR |
dc.title |
FARELERDE IN VITRO EMBRİYO KÜLTÜRÜ VE EMBRİYO TRANSFERİNİN FÖTAL AKCİĞER DOKUSUNDA NOTCH SİNYAL YOLAĞI HEDEF GENLERİNDEN HEY1 VE SKP2 GENLERİNİN EKSPRESYONU ÜZERİNE ETKİSİ |
tr_TR |
dc.type |
doctoralThesis |
tr_TR |
dc.contributor.department |
Adnan Menderes Üniversitesi Sağlık Bilimleri Enstitüsü Histoloji ve Embriyoloji (Veteriner) Anabilim Dalı Doktora Programı |
tr_TR |