dc.contributor.advisor |
Erbaş, Göksel |
|
dc.contributor.author |
Arslan, Ahmet |
|
dc.date.accessioned |
2019-07-08T08:32:42Z |
|
dc.date.available |
2019-07-08T08:32:42Z |
|
dc.date.issued |
2019-07-08 |
|
dc.date.submitted |
2019-06-17 |
|
dc.identifier.uri |
http://hdl.handle.net/11607/3555 |
|
dc.description.abstract |
Clostridium perfringens tip B ve tip D tarafından salgılanan epsilon toksin başta koyun ve keçilerde, daha az olarak da sığırlarda enteroroksemiye neden olan ve bütün dünyada yaygın görülen bir enfeksiyondur. Hastalığın hızlı ve şiddetli seyretmesi nedeniyle mücadelede aşılamalar ön plana çıkmaktadır. Genellikle farklı klostridial komponentlerin bir araya gelmesiyle polivalan hazırlanmış bu grup aşıların potens testleri, çok sayıda deney hayvanı kullanımını esas alan Toksin Nötralizasyon testi (TNT) ile yapılmaktadır. TNT’nin hayvan refahı ve metot doğrulama çalışmaları açısından dezavantajları olan bir test olması nedeniyle, uluslar arası standartlarda revizyonlar yapılması da dahil, alternatif metotların geliştirilmesi ve uygulanması teşvik edilmektedir. Bu amaçla serolojik tabanlı farklı in vitro metotlar uygulanabilmekle birlikte, bu testlerde kullanılan antijen, antikor ve referans standartların saflaştırılması ve standardizasyonu halen önemli bir sorun olarak durmaktadır. Bu bakımdan hücre kültürü analizleri klostridial aşıların potens testlerinde olası alternatifler içinde görülmektedir.
Bu gereklilikler göz önünde tutularak epsilon toksoid içeren aşılar ile immunize edilen tavşan serumlarında fare TNT ile Madin-Darby Canine Kidney (MDCK) hücre kültürlerinde sitotoksisite analizi ile antitoksin miktarları belirlenmiştir. İki metodun sonuçları arasında yüksek bir korelasyon (r=0.952, p<0.01, n=21, çift kuyruklu) ve iyi bir lineer ilişki (R2=0.906; Y=1.007*X + 0.994) gözlenmiştir. Epsilon toksinle muamele edilen hücrelerde toksin konsantrasyonuna eşdeğer hücre ölümleri gerçekleşmiştir. Ayrıca hücre kültürü analizlerinde yalancı pozitif reaksiyon görülmemiştir. Bu sonuçlar Clostridium perfringens epsilon toksoid içeren aşıların potens testlerinde, in vivo fare TNT yerine, in vitro MDCK hücre hattı seronötralizasyon analizinin başarıyla kullanılabileceğini göstermektedir. |
tr_TR |
dc.description.tableofcontents |
KABUL ONAY................................................................................................................. i
TEŞEKKÜR....................................................................................................................... ii
İÇİNDEKİLER.................................................................................................................. iii
SİMGELER VE KISALTMALAR DİZİNİ...................................................................... v
ŞEKİLLER DİZİNİ .......................................................................................................... vii
RESİMLER DİZİNİ.......................................................................................................... viii
TABLOLAR DİZİNİ......................................................................................................... ix
ÖZET................................................................................................................................. x
ABSTRACT....................................................................................................................... xi
1. GİRİŞ............................................................................................................................. 1
2. GENEL BİLGİLER....................................................................................................... 7
2.1. Clostiridium Genusu ve Klostridial Toksinler............................................................ 7
2.2. Enteropatojenik Enfeksiyonlarda Clostridium perfringens Toksinlerinin Rolü......... 10
2.3. Clostridium perfringens Epsilon Toksin..................................................................... 11
2.3.1. Yapısal Özellikleri................................................................................................... 11
2.3.2. Hücresel Etki Mekanizması..................................................................................... 12
2.3.3. ETX’e Bağlı Genel Toksemi Tablosu..................................................................... 13
2.3.4 Epsilon Toksinin Hücre Hatları Üzerindeki Etkisi................................................... 14
3. GEREÇ VE YÖNTEM.................................................................................................. 15
3.1. Gereç........................................................................................................................... 15
3.1.1. Aşılar........................................................................................................................ 15
3.1.2. Hayvanlar................................................................................................................. 15
3.1.3. Standart Toksin ve Antitoksinler............................................................................. 15
3.1.3.1 Standart toksinin hazırlanması............................................................................. 15
3.1.3.2 Standart antitoksinin hazırlanması....................................................................... 16
3.1.4. MDCK Hücre Hatları............................................................................................... 16
3.2. Yöntem........................................................................................................................ 17
3.2.1. İmmunizasyon Prosesi ve Serum Örneklerinin Elde Edilmesi................................ 17
3.2.2. Fare Toksin Nötralizasyon Test Prosedürü............................................................. 18
3.2.3. MDCK Hücre Kültüründe Toksin Nötralizasyon Yöntemi..................................... 19
3.2.3.1. Test reagentlerinin hazırlanması......................................................................... 19
3.2.3.2.Standart toksin, antitoksin ve bilinmeyen serum örneklerinin hazırlanması...................................................................................................................... 19
3.2.3.3. Testin yürütülmesi............................................................................................... 20
3.3. İstatistiksel Analizler.................................................................................................. 22
4. BULGULAR.................................................................................................................. 23
4.1. MDCK Hücre Analizi Bulguları................................................................................. 23
4.2. Mikroskobik Bulgular................................................................................................. 25
4.3. Korelasyon ve Linear Regresyon Sonuçları............................................................... 26
4.4 MDCK Hücre Analizi Optimizasyon Bulguları.......................................................... 28
5. TARTIŞMA................................................................................................................... 30
6. SONUÇLAR VE ÖNERİLER....................................................................................... 37
KAYNAKLAR.................................................................................................................. 38
EKLER............................................................................................................................... 43
Ek 1. Etik Kurul Raporu.................................................................................................... 43
Ek 2. İstatistiksel Hesaplamalar......................................................................................... 44
Ek 3. MDCK Hücre Hattı Ürün Genel Bilgisi…………………………………………... 45
ÖZGEÇMİŞ....................................................................................................................... 46 |
tr_TR |
dc.language.iso |
tur |
tr_TR |
dc.rights |
info:eu-repo/semantics/openAccess |
tr_TR |
dc.subject |
Epsilon toksin, Klostridial aşı, MDCK hücre hattı, Potens, TNT |
tr_TR |
dc.title |
Clostridium perfringens Epsilon Toksoid İçeren Aşılarda MDCK Hücre Hatlarında Toksisite Analizi ile Potensin Belirlenmesi |
tr_TR |
dc.title.alternative |
DETERMINATION OF POTENCY IN VACCINES CONTAINING CLOSTRIDIUM PERFRINGENS EPSILON TOXOID WITH A TOXICITY ANALYSIS IN MDCK CELL LINES |
tr_TR |
dc.type |
doctoralThesis |
tr_TR |
dc.contributor.department |
Aydın Adnan Menderes Üniversitesi, Sağlık Bilimleri Enstitüsü, Mikrobiyoloji Bölümü |
tr_TR |