Meme Kanseri Hücre Dizisinde (MCF-7)  Oleuropein ve D Vitamininin Antiproliferatif,  Apoptotik ve Antioksidan Etkilerinin Araştırılması

DSpace Ana Sayfası
→
Tez
→
Doktora
→
Öğe Göster

dc.contributor.advisor	Karul, Aslıhan
dc.contributor.advisor	Sakarya, Serhan
dc.contributor.author	Arı, Murat
dc.date.accessioned	2018-11-01T07:54:37Z
dc.date.available	2018-11-01T07:54:37Z
dc.date.issued	2018-11-01
dc.date.submitted	2018-09-28
dc.identifier.uri	http://hdl.handle.net/11607/3498
dc.description.abstract	Meme kanseri, kadınlarda en çok teşhis edilen kanser türü olup, dünya çapında kadınlarda ölüm sebepleri arasında ikinci sırada yer almaktadır. Bu kadar önemli bir sağlık sorununa çözüm bulunması amacıyla, tedaviye yönelik farklı çalışmalar yapılmakta ve farklı maddelerin bu hastalıklar üzerindeki etkileri yoğun bir şekilde araştırılmaktadır. Bu çalışmada meme kanseri hücre dizisinde (MCF-7) oleuropein ve D vitamininin hem ayrı ayrı hem de kombine kullanımının antiproliferatif, apoptotik ve antioksidan etkilerinin araştırılması amaçlanmıştır. Kemoterapötik ajanlar neoplastik hücreleri tahrip ederken bazı normal hücreler de bundan etkilenmekte ve bu durum çeşitli yan etkilere neden olmaktadır. Oleuropeinin güçlü bir antioksidan etki göstermesi, özellikle kanser tedavilerinde kullanılan ilaçların yan etkilerinin azaltılması ve reaktif oksijen türlerinin (ROS) seviyesini azaltması açısından önem teşkil etmektedir. D vitamininin, kalsiyum emilimi ve kemik sağlığı açısından önemli olduğu bilinmektedir. Ancak, son zamanlarda yapılan çalışmalarda D vitamininin meme kanseri hücresinin büyümesini kontrol ettiğini ortaya çıkarmakta ve epidemiyolojik çalışmalarda da D vitamininin düşük kanser riski ile bağlantılı olduğu ileri sürülmüştür. Hatta D vitamininin antioksidan etki gösterdiğine dair çalışmalar da mevcuttur. Çalışmada oleuropein ve D vitamininin IC50 değerlerini belirlemek için MCF-7 hücre dizisi üzerine oleuropeinin ve D vitamininin farklı konsantrasyonları uygulandı ve sitotoksik aktiviteleri 24, 48 ve 72. saatte WST-1 yöntemi kullanılarak belirlendi. Oleuropein ve D vitamininin 48. saatteki IC50 değerleri bulunduktan sonra hem oleuropein için, hem D vitamini için hem de oleuropein-vitamin D kombinasyonu için apoptotik etkileri belirlemek amacıyla anneksin 5 ve kaspaz 3/7 kiti kullanıldı. Biyokimyasal parametrelerin tayini için tanımlı IC50 dozları hücrelere uygulandıktan sonra hücre lizatları elde edildi. Bu numuneler ile öncelikle hücrenin protein düzeyi hesaplandı. Sonrasında TOS, TAS, OSİ, SOD, GPx aktivite tayini, MDA ve NO tayini yapıldı. Sonuç olarak bu çalışmada doz ve zamana bağlı olarak oleuropeinin ve D vitamininin MCF-7 hücre proliferasyonunu azalttığını gözlemledik. Ayı zamanda elde ettiğimiz apoptoz artışı da bu proliferasyon inhibisyonunu açıklamaktadır. Elde ettiğimiz diğer bir veri olan antioksidan parametrelerin artışı da proliferasyonun inhibisyonunu ve apoptozun artışını desteklemektedir. Ayrıca oleuropein ve D vitamininin kombine kullanımının güçlü bir sinerjetik etkisi olduğunu gözlemledik. Bu açıdan bakıldığında, MCF-7 hücrelerinde moleküler antikanserojenik mekanizmaları, tekli ya da kemoterapötik ajanlarla kombine çalışılarak, meme kanseri tedavisi için yeni kemoterapötik ve kemopreventif ajanların gelişimine önemli katkı sağlayacağı kanaatindeyiz.	tr_TR
dc.description.sponsorship	TPF-17035	tr_TR
dc.description.tableofcontents	İÇİNDEKİLER KABUL VE ONAY SAYFASI i TEŞEKKÜR ii İÇİNDEKİLER iii SİMGELER VE KISALTMALAR DİZİNİ vii ŞEKİLLER DİZİNİ ix RESİMLER DİZİNİ xi TABLOLAR DİZİNİ xii ÖZET xiv ABSTRACT xvi 1. GİRİŞ 1 2. GENEL BİLGİLER 3 2.1. Kanser 3 2.1.1. Kanser Oluşumuna Etki Eden Faktörler 5 2.2. Meme Kanseri 9 2.2.1. Meme Anatomisi 10 2.2.2. Meme Kanseri Evreleri 11 2.2.3. Meme Kanseri Risk Faktörleri 12 2.2.3.1. Obezite 13 2.2.3.2. Beslenme 13 2.2.3.3. Fiziksel aktivite 13 2.2.3.4. Alkol 13 2.2.3.5. Sigara 14 2.2.3.6. Genetik kalıtımsal özellikler 14 2.2.3.6.1. BRCA1 ve BRCA2 genleri 14 2.2.3.7. Östrojen 15 2.2.3.8. Serbest radikaller ve oksidatif stres 15 2.3. Antioksidanlar 20 2.3.1. Endojen antioksidanlar 21 2.3.1.1. Enzimatik olanlar 21 2.3.1.2. Enzimatik olmayanlar 21 2.3.2. Ekzojen Antioksidanlar 21 2.4. MCF-7 Meme Kanseri Hücre Hattı 22 2.5. Hücre Ölüm Mekanizmaları 22 2.5.1. Apoptoz (Programlı Hücre Ölümü) 22 2.5.2. Nekroz 24 2.5.3. Apoptozda Görülen Morfolojik Değişiklikler 27 2.5.4. Kaspaz Aktivasyon Mekanizması 28 2.6. Oleuropein 29 2.6.1. Oleuropeinin Antikanserojenik ve Apoptotik ve Etkisi 31 2.7. Vitamin D 32 2.7.1. Vitamin D’nin Antikanserojenik ve Apoptotik Etkisi 37 2.7.2. Vitamin D ve Meme Kanseriyle ilgili Pre-Klinik Çalışmalar 38 2.7.3. Vitamin D ve Hücre Büyümesinin Durması ile İlişkisi 38 2.7.4. Vitamin D ve İnvazyon ve Metastazın İnhibisyonuna Etkisi 38 2.7.5. Vitamin D ve Anti-İnflamasyon Etkisi 38 2.7.6. Vitamin D ve Östrojen Yolağı İnhibisyonu 39 2.7.7. Vitamin D ve Epidemiyolojik Çalışmalar 39 3. GEREÇ VE YÖNTEM 40 3.1. Kullanılan Malzemeler 40 3.2. Kullanılan Cihazlar 41 3.3. Kullanılan Çözeltiler 42 3.4. Deney Düzeneğinin Oluşturulması 42 3.4.1. Hücrelerin Çözdürülmesi 42 3.4.2. Hücrelerin Pasajlanması 43 3.4.3. Hücrelerin Sayılması ve Canlılık Kontrolü 44 3.4.4. Hücrelerin Dondurulması 46 3.4.5. MCF-7 Hücreleri İçin Complete Medium Hazırlanması 47 3.4.6. MCF-7 Hücrelerinin Kullanımı 47 3.4.7. Oleuropein Dozunun Belirlenmesi 47 3.4.8. Vitamin D Dozunun Belirlenmesi 48 3.4.9. Hücre Proliferasyon Analizi 49 3.4.9.1. WST-1 Testi (Water Soluble Tetrazolium Test) 49 3.4.10. Apoptotik Analizler 51 3.4.10.1. Anneksin V testi 52 3.4.10.2. Kaspaz-3/7 testi 53 3.4.11. Biyokimyasal Analizler 56 3.4.12. BCA Protein, SOD, GPx, MDA ve NO Analizleri için Hücrelerden Lizat Eldesi 57 3.4.12.1. Total protein tayini 59 3.4.12.2. Biyokimyasal TOS ve TAS analizleri 60 3.4.12.3. SOD aktivite tayini 62 3.4.12.4. G-Px aktivite tayini 64 3.4.12.5. MDA tayini 66 3.4.12.6. NO tayini 67 3.5. İstatistiksel Yöntemler 71 4. BULGULAR 72 4.1. Hücre Canlılığı Değerlendirme Bulguları 72 4.1.1. Etkin Oleuropein Dozunun Belirlenmesi 72 4.1.2. Etkin Vitamin D Dozunun Belirlenmesi 74 4.1.3. Oleuropeinin Anti-proliferatif Etkisinin WST-1 Yöntemiyle Belirlenmesi 76 4.1.4. Vitamin D’nin Anti-proliferatif Etkisinin WST-1 Yöntemiyle Belirlenmesi 78 4.2. WST-1 Yöntemiyle Elde Edilen Sitotoksisite Sonuçları 80 4.3. Apoptoz Değerlendirme Sonuçları 80 4.3.1. Anneksin V Testi Sonuçları 82 4.3.2. Kaspaz 3/7 Testi Sonuçları 83 4.4. Biyokimyasal Analizler 84 4.4.1. Total Protein Analizi Sonuçları 84 4.4.2. Biyokimyasal Total Oksidan ve Total Antioksidan Kapasitesi Analizi Sonuçları 85 4.4.3. Süperoksit Dismutaz (SOD) Aktivite Sonuçları 89 4.4.4. Glutatyon Peroksidaz (GPx) Aktivite Sonuçları 90 4.4.5. Malondialdehit (MDA) Analizi Sonuçları 91 4.4.6. Nitrik Oksit (NO) Analizi Sonuçları 92 5. TARTIŞMA 93 6. SONUÇLAR VE ÖNERİLER 112 KAYNAKLAR 115 ÖZGEÇMİŞ 136	tr_TR
dc.language.iso	tur	tr_TR
dc.rights	info:eu-repo/semantics/closedAccess	tr_TR
dc.subject	MCF-7, Oleuropein, D Vitamini, Sitotoksisite, Apoptoz, Antioksidan	tr_TR
dc.title	Meme Kanseri Hücre Dizisinde (MCF-7) Oleuropein ve D Vitamininin Antiproliferatif, Apoptotik ve Antioksidan Etkilerinin Araştırılması	tr_TR
dc.type	doctoralThesis	tr_TR
dc.contributor.authorID	10216910	tr_TR
dc.contributor.department	Aydın Adnan Menderes Üniversitesi, Tıp Fakültesi, Biyokimya Bölümü	tr_TR