Methotrexate (MTX) has a folic acid antagonist, antiproliferative, anti-inflammatory and immunomodulatory effects. MTX is used in the treatment of acute lymphoblastic leukemia non-hodgkin lymphoma, breast cancer and head and neck cancer, as well as non-cancer diseases (rheumatoid arthritis). The oxidative stress-induced testicular damage caused by MTX is on spermatogenic cells and sertoli cells. It also causes dysfunction in leydig cells and consequently decrease in testosterone level. The damages to spermatogenic cells, which are very sensitive to the harmful effects of chemotherapeutic drugs, are among the agents that can lead to MTX infertility. Stem cells are cells that have the capacity to regenerate themselves, to take the place of cells lost during the life of an organism, and to form functionally differentiated cells. Although the stem cells are thought to be infinitely divisible by renewing themselves, there is little evidence that stem cells have the ability to reproduce infinitely. Stem cells contribute to regeneration in the body, such as epithelial regeneration, hematopoiesis, and spermatogenesis. The mesenchymal stem cells to be removed in the rat bone marrow will be brought to passage 3 in the appropriate environment. These stem cells will be marked with Red Fluorescent protein. Because the stem cells are labeled with Red Fluorescent Protein, the presence of the stem cells we give with the help of a fluorescence microscope will be shown to the testis. CD 11b, CD 29, CD 45 and CD 90 will be used to analyze the expression of flow cytometric, surface marker of mesenchymal stem cells. The stem cells we obtained from bone marrow will show positive expression of the mesenchymal stem cell with Flow cytometride CD 29 and CD 90 markers. Negative expression with CD45 and CD11b, which are hematopoietic markers, will be shown. Flow cytometry and CD34 negative determination of lung tissue will determine the root cell as mesenchymal stem cell.
Metotreksat (MTX) bir folik asit antagonisti, antiproliferatif, anti-inflamatuar ve immünomodülatör etkilere sahiptir. Akut lenfoblastik lösemi, non-hodgkin lenfoma, meme kanseri ve baş boyun kanserlerinin tedavisinde kullanıldığı gibi kanser olmayan hastalıklarda da (romatoid artrit) kullanılmaktadır. MTX neden olduğu oksidatif strese bağlı testiküler hasarı spermatojenik hücreleri ve sertoli hücreleri üzerinde olmaktadır. Aynı zamanda leydig hücrelerinde de fonksiyon bozukluğuna ve buna bağlı olarak testosteron seviyesinde azalmaya neden olmaktadır. Kemoterapotik ilaçların zararlı etkilerine çok duyarlı olan spermatojenik hücrelere verdiği zararlar sonucu MTX infertiliteye yol açabilecek ajanlar arasında belirtilmiştir. Kök hücreler, kendilerini yenileme, bir organizmanın yaşamı boyunca kaybolan hücrelerinin yerini yenisinin alması ve fonksiyonel olarak farklılaşmış hücreleri oluşturabilme kapasitesine sahip hücrelerdir. Her ne kadar kök hücrelerin kendini yenileyerek bölünmeleri ile sonsuz bölünebildikleri düşünülse de kök hücrelerin sonsuz çoğalabilme yeteneklerini gösteren çok az kanıt vardır. Kök hücreler vücutta, epitel yenilenmesi, hematopoez ve spermatogenez gibi rejenerasyona katkıda bulunurlar. Sıçan kemik iliğinde alınacak olan mezenkimal kaynaklı kök hücreler uygun ortamda pasaj 3‟e getirilecek. Bu kök hücreler Red Fluorescent Proteinle (RFP) işaretlenecek. Kök hücreler RFP ile işaretlendiği için florasans mikroskop yardımı ile verdiğimiz kök hücrelerin testiste varlığı gösterilmiş olacak. Flow sitometrik, mezenkimal kök hücrelerin yüzey marker‟ının ekspresyonu analiz etmek için CD 11b, CD 29, CD 45 ve CD 90 kullanılacaktır.
Kemik iliğinden aldığımız kök hücreleri Flow sitometride CD 29 ve CD 90 markerları ile mezenkimal kök hücrenin pozitif ekspresyonu gösterilecektir.
xiv
Hematopoetik belirteçlerden olan CD 45 ve CD 11b ile negatif ekspresyon olduğu gösterilecektir.
Akciğer dokusunda flowsitometri ile CD 34 negatif olarak belirlenmesi ile kök hücrenin mezenkimal kaynaklı kök hücre olduğu belirlenecektir.
