Farelerde İn Vi̇tro Embri̇yo Kültürü Ve Embri̇yo Transferi̇ni̇n Yeti̇şki̇n Akci̇ğer Dokusunda Toll-Benzeri̇ Reseptör (Tlr)-5 Ekspresyonu Üzeri̇ne Etki̇si̇

Abstract

Üremeye yardımcı tedavi yöntemleri (ÜYTE), infertilite tedavisinde tüm dünyada yaygın olarak kullanılmaktadır. ÜYTE yöntemleri arasında in vitro fertilizasyon ve embriyo transferi yaygın olarak kullanılmaktadır. Ancak elimizdeki veriler çeşitli ÜYTE yöntemleri sonucu dünyaya gelen çocukların spontan gebeliklerle kıyaslandığında çeşitli sağlık sorunlarına ve astım gibi solunum yolları hastalıklarına karşı daha fazla duyarlı olduklarını göstermektedir. Doğal bağışıklık sistemi, patojenlere ve yabancı antijenlere karşı konakçı vücudunda ilk savunma hattını oluşturmaktadır. Toll-benzeri reseptörler (TLR), doğal bağışıklık sisteminin en önemli unsurlarından birisidir. TLR’ler arasında önemli bir yere sahip olan TLR 5, bakteriyel flagellini tanıyarak immun yanıtın oluşmasında önemli bir rol oynamaktadır. Sunulan tez çalışmasında, in vitro embriyo kültürü ve embriyo transferi işlemlerinin yetişkin akciğer dokusunda TLR 5 ekspresyonu üzerine herhangi bir etkisinin olup olmadığının incelenmesi amaçlanmıştır. Yapılan çalışmada, bir adet Kontrol grubu ve bir adet Deneme grubu olmak üzere iki gruba yer verilmiştir. Deneme grubu, PMSG+hCG uygulaması yapılan, F1 hibrit dişilerin aynı yaştaki F1 hibrit erkeklerle çiftleştirilmesi sonucu elde edilen döllenmiş yumurta hücrelerinin (zigot) atmosferik oksijen konsantrasyonunda geliştirilmesiyle elde edilen blastosist aşamasındaki embriyoların yalancı gebe dişilere transfer edilmeleri neticesinde büyütülen yavrulardan oluşturulmuştur. Kontrol grubu ise, PMSG+hCG uygulaması yapılmadan, 8-12 haftalık F1 hibrit dişilerin aynı yaştaki F1 hibrit erkeklerle çiftleştirilmeleri sonucu doğan yavrulardan elde edilen yetişkin farelerden oluşturulmuştur. Kontrol ve Deneme gruplarına ait elde edilen yetişkin akciğer dokularında, dokunun genel histolojik yapısını incelemek amacıyla Crossman’ın üçlü boyama yöntemi uygulanmıştır. Dokularda, hangi hücreler tarafından TLR 5’in eksprese edildiğini göstermek amacıyla immunohistokimya ve immunofloresan analizleri gerçekleştirilmiştir. TLR 5 ekspresyonunun mRNA ve protein düzeylerinde ekspresyon düzeyini belirlemek amacıyla, real-time PCR ve western blot tekniklerinden yararlanılmıştır. Elde edilen sonuçlar, Kontrol ve Deneme gruplarında TLR 5 ekspresyon profilinin benzer olduğunu ve TLR 5’in hava yollarında, alveol duvarında, damar çevresinde, damar lümeninde eksprese edildiğini göstermiştir. Ardışık kesitlerin TLR 5 ve hücre-spesifik belirteçler ile boyanması sonucunda, makrofaj, Clara ve Tip 2 hücreleri tarafından eksprese edildiği saptanmıştır. Real-time PCR ve western blot analizlerinden elde edilen sonuçlar, Kontrol grubu ile kıyaslandığında, Deneme grubunda TLR 5 mRNA düzeyinin 1,03 kat arttığını (p>0,05), TLR 5 proteinine ait ekspresyon düzeyinin ise 1,30 kat azaldığını göstermiştir (p>0,05). Elde edilen sonuçlar TLR 5’in yetişkin farelerde akciğer dokusunda Tip II pnömosit, makrofaj ve Clara hücreleri de dahil olmak üzere belirli hücreler tarafından eksprese edildiğini göstermekte ve in vitro embriyo kültürü ve embriyo transferi işlemlerinin yetişkin akciğer dokusunda TLR 5 ekspresyonunu değiştirerek akciğer immun yanıtını etkileyebileceğini düşündürmektedir.