| dc.contributor.advisor |
KIRKAN, ŞÜKRÜ, Prof. Dr. |
|
| dc.contributor.author |
AYCEN, UĞUR |
|
| dc.date.accessioned |
2018-02-19T13:06:41Z |
|
| dc.date.available |
2018-02-19T13:06:41Z |
|
| dc.date.issued |
2018-02-19 |
|
| dc.date.submitted |
2018-01-25 |
|
| dc.identifier.uri |
http://hdl.handle.net/11607/3274 |
|
| dc.description.abstract |
Bu çalışmada, Mayıs-Eylül 2017 tarihleri arasında Aydın ili ve çevresinde bulunan çeşitli işletmelerdeki klinik mastitisli 90 adet inekten aseptik ve tekniğine uygun olarak 20’şer ml olmak üzere steril kaplara süt numunesi alınmıştır. Alınan numuneler soğuk zincir altında Adnan Menderes Üniversitesi Veteriner Fakültesi Mikrobiyoloji Anabilim Dalı Laboratuvarına Aspergillus flavus M1 toksininin varlığı yönünden incelenmek üzere getirilmiştir. İki örnek yapısal deformasyonlardan dolayı araştırma dışında bırakılmıştır. Süt örneklerindeki Aspergillus flavus M1 toksininin varlığının araştırılması ELISA tekniği ile gerçekleştirilmiştir. Aflatoxin M1 ELISA sonuçları 0 ppt, 5 ppt, 15 ppt, 30 ppt, 60 ppt ve 100 ppt içerikli pozitif kontroller ile karşılaştırılarak değerlendirilmiştir. İncelenen 88 örnek için; 7 (% 8,0)’sinde 5 ppt, 12 (% 13,6)’sinde 15 ppt, 32 (% 36,4)’sinde 100 ppt, 37 (% 42,0)’sinde ise 0 ppt düzeylerinde Aflatoksin M1 tespit edilmiştir. Bu sonuçlara göre 32 (% 36,4)’sinde Avrupa Birliği ülkelerinde çiğ sütler için kabul edilen sınırın (50 ppt) üzerinde AFM1 pozitifliği saptanmıştır. Araştırmamızda Aflatoxin M1 ELISA kiti ile incelenen 88 adet mastitisli süt örneğinden elde edilen DNA’lar Aspergillus flavus tür spesifik PCR işlemine tabi tutulmuştur. PCR sonucunda; 7 (% 36,8)’sinde 0 ppt, 1 (% 5,2)’inde 5 ppt, 2 (% 10,5)’sinde 15 ppt ve 9 (% 47,5)’unda 100 ppt düzeyinde Aflatoxin M1 ELISA kiti toksin varlığı belirlenmiştir. Sonuç olarak araştırmamızda ELISA ile 32 örnekte 100 ppt düzeyinde AFM1 pozitifliği saptanırken, PCR ile 9 örnekte 100 ppt düzeyinde pozitiflik saptanmıştır. ELISA testi sonucunda daha fazla çıkan pozitif sonucun, çapraz reaksiyonlara bağlı olarak şekillendiği, teşhis ve identifikasyonda ise FLA gen primerleri ile yapılan PCR yönteminin daha güvenilir olduğu ortaya konulmuştur. |
tr_TR |
| dc.description.tableofcontents |
KABUL ONAY i
TEŞEKKÜR ii
İÇİNDEKİLER iii
SİMGELER VE KISALTMALAR DİZİNİ vi
ŞEKİLLER DİZİNİ viii
RESİMLER DİZİNİ ix
TABLOLAR DİZİNİ x
ÖZET xi
ABSTRACT xii
1. GİRİŞ 1
2. GENEL BİLGİLER 4
2.1. Süt ve Sütün Bileşimi 4
2.2. Mastitis-Mastitisli Süt ve Bileşimi 7
2.3. Mikotoksinler 10
2.3.1. Tarihçe 10
2.3.2. Genel Özellikleri 12
2.3.3. Sentezini Etkileyen Etmenler 13
2.3.3.1. Su Aktivitesi veya Bağıl Nem Etkisi 14
2.3.3.2. Sıcaklık Etkisi 14
2.3.3.3. Diğer Durumların Etkisi 14
2.4. Mikotoksinlerin Sınıflandırılması 15
2.4.1. Mantar Çeşidine Göre 15
2.4.2. Ana Etkilerine Göre 16
2.4.3. Yapılarına Göre 17
2.5. Sütteki Mikotoksinler 17
2.5.1. Fusarium Toksinleri 18
2.5.1.1. Deoksinivalenol 18
2.5.1.2. T-2 Toksin 19
2.5.1.3. Zearalenon 19
2.5.1.4. Fumonisinler 20
2.5.2. Penicillium Toksinleri 20
2.5.2.1. Okratosinler 20
2.5.3. Aspergillus Toksinleri 21
2.5.3.1. Aflatoksinler 21
2.5.3.1.1. Aflatoksinlerin Özellikleri 22
2.5.3.1.2. Aflatoksinlerin Toksisitesi ve Etkileri 23
2.5.3.1.3. Aflatoksin Zehirlenmelerinde Tanı 25
2.5.3.1.4. Aflatoksinlerin Oluşumunun ve Kontaminasyonlarının Önlenmesi 27
2.5.3.1.4.1.Fiziksel Uygulamalar 28
2.5.3.1.4.2. Kimyasal Uygulamalar 28
2.5.3.1.4.3. Biyolojik Uygulamalar 29
2.5.3.1.5. Aflatoksinlerin İnsan Sağlığına Etkileri ve Yasal Düzenlemeler 29
2.6. Süt ve Süt Ürünlerinde Aflatoksin ve İlgili Çalışmalar 34
3. GEREÇ VE YÖNTEM 39
3.1. Gereç 39
3.1.1. Araştırma Materyali 39
3.1.2. ELISA Test Kiti 39
3.1.2.1. Veratox® for Aflatoxin M1 Prosedürü 39
3.1.2.2. Pozitif kontrol 39
3.1.3. PCR 40
3.1.3.1. Kullanılan Cihazlar 40
3.1.3.2. Solüsyonlar 40
3.1.3.2.1. TBE (Tris, Borik Asit, EDTA, pH: 8.0) Buffer 40
3.1.3.2.2. Jel Loading Buffer (6X) 40
3.1.3.2.3. Tris (1M) 40
3.1.3.2.4. TE Buffer (10 mM tris, 1mM EDTA) 41
3.1.3.3. MgCl2, Taq DNA Polimeraz, 10X Taq Buffer, dNTP Set 41
3.1.3.4. 2X Taq Master Mix 41
3.1.3.5. Primerler 41
3.1.4. Elektroforez 41
3.1.4.1. Agarose Jel Hazırlanışı 41
3.1.4.2. Marker 42
3.1.4.3. Ethidium Bromid 42
3.2.Yöntem 42
3.2.1. ELISA 42
3.2.2. DNA Ekstraksiyonu 44
3.2.3. PCR 44
3.2.3.1. Aspergillus flavus Tür Spesifik PCR 44
4. BULGULAR 46
4.1. ELISA Bulguları 46
4.2. PCR Bulguları 46
5. TARTIŞMA 48
6. SONUÇ ve ÖNERİLER 52
KAYNAKLAR 53
ÖZGEÇMİŞ 68 |
tr_TR |
| dc.language.iso |
tur |
tr_TR |
| dc.rights |
info:eu-repo/semantics/closedAccess |
tr_TR |
| dc.subject |
Aspergillus flavus M1, ELISA, FLA gen primerleri, mastitisli süt, PCR |
tr_TR |
| dc.title |
MASTİTİSLİ SÜTLERDE GÖRÜLEN ASPERGILLUS FLAVUS VARLIĞININ PCR İLE ARAŞTIRILMASI |
tr_TR |
| dc.title.alternative |
INVESTIGATION OF THE PRESENCE OF ASPERGILLUS FLAVUS IN MASTITIS MILK WITH PCR |
tr_TR |
| dc.type |
masterThesis |
tr_TR |
| dc.contributor.authorID |
10181645 |
tr_TR |
| dc.contributor.department |
Adnan Menderes Üniversitesi, Sağlık Bilimleri Enstitüsü, Mikrobiyoloji Anabilim Dalı |
tr_TR |