Amaç: CD30 aktivasyonu sistemik anaplastik büyük hücreli lenfoma hücrelerinde büyümeyi durdurmaktadır.
Bu büyüme inhibisyonunun hangi mekanizmalarla meydana geldiği bilinmemektedir. CD30 reseptör molekülü
tümör nekrozis faktör ailesinin bir ferdi olmakla birlikte bir ölüm bölgesi (deaş domain) içermez. Bu nedenle
hücre çoğalmasını nasıl olup da durdurabildiği tartışmalı bir konudur.
Yöntem: Bu çalışmada bir nodal anaplastik hücre lenfoma hücre serisi olan Karpas 299.u, CD30 aktivasyonunun
çoğalma üzerindeki baskılayıcı etkilerini araştırmak amacıyla kullandık. CD30 aktivasyonu bir CD30 agonist
antikoru olan HeFi-1 ile sağlandı. CD30 aktivasyonunu takiben Annexin V immun boyası ve akım sitometrik
yöntemle apoptoz tespiti yapıldı. 72 saatlik bir gözlem süresince apoptoz gözlenmedi.
Bulgular: Apoptoz gözlenmemesi üzerine, hücreler hücre siklusu açısından senkronize edilerek CD30
aktivasyonunu takiben DNA içeriği akım sitometrik yöntemle tespit edildi. Bu yöntemin uygulanmasıyla G1
fazında bir kısmi hücre siklus arresti saptandı. Hücrelerin p21 ve retinoblastoma protein düzeyleri Western blot
analizi ile ölçüldü. Bu ölçümler sonunda CD30 aktivasyonuyla birlikte p21 düzeyi artışı ve retinoblastoma
proteini hipo-fosforilasyonu tespit edildi. Bu bulgular G1 fazında bir hücre siklusu arresti varlığını ve aracı
moleküllerin Rb ve p21 olduğunu ortaya koymaktadır.
Sonuç: CD30 aktivasyonunun CD30+ nodal anaplastik lenfoma hücre serilerinde hücre çoğalması üzerindeki
baskılayıcı etkilerinin zannedildiği gibi apoptoz yoluyla değil, hücre siklusunu düzenleme yoluyla olduğu ortaya
çıkarılmıştır. Bu bulgular nodal anaplastik hücreli lenfomaların tedavisinde yeni tedavi stratejilerinin geliştirilmesine
yardımcı olabilir.
Aims: CD30 activation causes growth inhibition of the systemic anaplastic large cell lymphoma cell lines. The
mechanism of growth inhibition is not well characterized. Since CD30 does not have a death domain like the other
tumor necrosis factor receptor superfamily members Fas and TNFRI, the mechanism of growth inhibition is a
matter of controversy.
Methods: In this study, we analyzed the growth inhibitory effects of CD30 activation on the systemic ALCL
cell line Karpas 299 by using a CD30 activating antibody HeFi-1. We first investigated the presence of apoptosis
by Annexin V and propidium iodide staining using flow cytometric analysis. We did not observe any apoptotic
changes or cell death during the 72 hours following CD30 activation, despite a decrease in thymidine incorporation,
which prompted us to investigate the possibility of cell cycle arrest caused by CD30 activation.
Results: Upon synchronization of the cells and incubation with the HeFi-1 antibody, we observed a partial
arrest at G1 phase demonstrated by propidium iodide staining of the permeabilized cells. We then investigated
the expression of cell cycle inhibitory proteins p16, p21, p27 and retinoblastoma protein (Rb) by Western
blotting. We observed expression of p21 and hypo-phosphorylation of Rb protein secondary to CD30 activation.
Significance: These results are consistent with cell cycle arrest in the G1 phase of the cell cycle following CD30
activation. This finding is contrary to the accepted belief that CD30 activation causes apoptosis. These findings
may help the development of new therapeutic strategies against nodal anaplastic large cell lymphomas.
