Amaç: Bu çalışmanın amacı; Rapamisin, Melatoninin ve bunların birlikte kullanımlarının, östrojen reseptörü (ER)-negatif meme kanseri hücre hattının (4T1 hücre hattı) deoksiribonükleikasit (DNA) metilasyonu ve hücre proliferasyonu üzerine olan etkilerini incelemekti.
Gereç ve Yöntemler: İlaç kombinasyonlarına (kontrol, Rapamisin, Melatonin, Rapamisin + Melatonin) ve bu ilaçların farklı zaman dilimlerinde (24, 48 ve 72 saat) uygulanmalarına bağlı olarak; 4T1 hücre hattı ile dört farklı grup oluşturuldu. İlaçlar, bu zaman dilimleri için sırasıyla; 1, 2 ve 3 defa uygulanmıştır. Tüm örnekler ile hücre sayımı, immun-boyama (Ki67, DNA metiltranferaz-1 (DNMT-1), DNA metiltransferaz-3a (DNMT-3a) ve p53 antikorları ile) ve Real-time PCR (polimeraz zincir reaksiyonu) (DNMT-1 ve DNMT-3a primerleri ile) yapıldı.
Bulgular: Rapamisin ve Rapamisin + Melatonin uygulanmış olan gruplarda canlı/ölü hücre oranı düşüş göstermiştir. İlaç uygulanan gruplarda 24. saate kıyasla 48. saatte, Ki67 immun-boyaması ile proliferasyonda düşüş gözlenmiştir. Ayrıca DNMT-1 ekspresyonları; 72. saatte, 24. saate kıyasla tüm gruplarda, özellikle rapamisin uygulanan grupta, düşüş göstermiştir. DNMT-3a ekspresyonu ise 72. saatte, 24. saate kıyasla tüm gruplarda, özellikle rapamisin uygulanan grupta, artış göstermiştir. İlaç verilen gruplarda (en çok rapamisin uygulanmış olan grupta), ilaç uygulaması arttıkça ve süre geçtikçe artan p53 ekspresyonu gözlendi. DNMT-1 gen ekspresyonunun Real-time RT-PCR sonuçlarına göre, DNMT-1 gen ekspresyonu Melatonin uygulanan grupta kontrol grubuna kıyasla düşme eğilimi gösterirken, rapamisin ve Rapamisin + Melatonin uygulanan gruplarda kontrol grubuna göre artmıştır. DNMT-3a gen ekspresyonunun Real-time RT-PCR sonuçlarına göre ise, DNMT-3a gen ekspresyonu, tüm ilaç uygulanan gruplarda kontrol grubuna kıyasla artmıştır.
Sonuç: Rapamisinin, metastatik meme kanseri hücrelerinde hem hücre canlılığı açısından hem de Ki67, DNMT-1, DNMT-3a ve p53’ün ekspresyonel değişimleri açısından Melatoninden daha etkili olduğu bulunmuştur.
Objective: The aim of this study was to investigate the effects of Rapamycin and
Melatonin and their combination on deoxyribonucleic acid (DNA) methylation and
cell proliferation in a estrogen receptor (ER)-negative breast cancer cell line (4T1
cell line).
Materials and Methods: Four groups were designed with 4T1 cell line depending
on drug combination (control, Rapamycin, Melatonin, Rapamycin + Melatonin) and
their administration on different time periods (24, 48 and 72 hours). The drugs
were administrated for 1, 2 and 3 times, respectively for these time periods. All
samples were counted; immunostained (Ki67, DNA methyltransferase-1 (DNMT-1),
DNA methyltransferase-3a (DNMT-3a) and p53) and real-time polymerase chain
reaction (PCR) (DNMT-1 and DNMT-3a) was performed.
Results: The live/dead cell ratios were decreased in the Rapamycin and Rapamycin +
Melatonin applied groups. Ki67 immunostaining showed that there was a decreased
proliferation in the drug applied groups at 48th hours compared to the 24th hours.
Also DNMT-1 expressions were decreased at 72th hour compared to that at 24th
hour in all groups, especially in the Rapamycin administrated group. Adversely,
DNMT-3a expression was increased at 72th hour compared to that at 24th hour
in the groups, especially in the Rapamycin administrated group. Furthermore, an
increased expression of p53 was seen in the drug given groups (highest in the
Rapamycin applied group) when the time prolonged. Real-time RT-PCR analysis
of DNMT-1 gene expression showed a decreased expression level in the Melatonin
given group compared to the control group and an increased expression level was
seen in the Rapamycin and Rapamycin + Melatonin administrated groups compared
to the control group.
Conclusion: As a result, it was found that Rapamycin is more effective in
metastatic breast cancer cells than Melatonin, both in the manner of cell viability
and expressional changes of Ki67, DNMT-1, DNMT-3a and p53.
