Fruktoz, trehaloz ve sükroz içeren tris bazlı sulandırıcıya kolesterol yüklü siklodekstrin (CLC) ilavesinin koç spermasının dondurulabilirlik ve çözüm sonu spermatolojik parametreler üzerine etkilerinin araştırılması

Abstract

The ram sperm undergo different type of damages during cryopreservation process which consequently results in low pregnancy rate in sheep. Among them damages the sperm membrane is the major factor that affects the sperm survival post-cryopreservation. Many studies have been conducted to minimize the adverse effect of cryopreservation on sperm plasma membrane. Therefore, the objective of present study was to protect the sperm membrane during cryopreservation by using different sugars (fructose, sucrose and trehalose) in combination with cholesterol in semen extenders. The information based upon post-thaw parameters would help to choose the best combination for ram sperm cryopreservation. Five Kıvırrcık rams were used and semen was collected using electro-ejaculator. Initial motility, concentration and abnormal sperm percentage were evaluated. After evaluation, semen was split into two parts: one was treated with CLC (3mg/120x106 sperm) and second remained untreated. After treatment, CLC treated and untreated parts was further divided into three aliquots and diluted with either fructose, sucrose or trehalose supplemented extenders. Then all the diluted aliquots were packed into straws and cooled to 4°C for two hours. After equilibration at 4°C, straws were frozen in liquid nitrogen vapor and stored in liquid nitrogen. Straws were thawed after freezing and sperm characteristics (motility, live/dead, membrane integrity, abnormal sperm and acrosome integrity) were estimated. The post-thaw results showed that there is no statistical difference in motility amongst the groups, however, CLC-trehalose (54.5±3.28%) and CLC-fructose (54±2.86%) has highest motility compared to other groups. Live sperm percentage was significantly (P<0.05) higher in CLC-fructose and sucrose as compared to untreated fructose and sucrose. There is no significant difference in abnormal sperm percentage between CLC treated and untreated group. CLC-trehalose has highest percentage of total intact membrane and live-intact membrane sperm compared to other groups. The CLC-treated groups has significantly (P<0.05) low percentage of sperm with reacted acrosome as compared to CLC-untreated sperm. In conclusion; although the sugars utilized in this study has influenced some of the post-thaw paramaters the protective influence of CLC on freezing ram spermatozoa was more prominent than sugars.

Bu çalışmanın amacı koç spermasının dondurulması sırasında ortaya çıkan ve tohumlamalardan sonra gebelik oranlarının önemli ölçüde düşmesine yol açan spermatozoon membran hasarlarının minimize edilmesi amacıyla Fruktoz, Trehaloz ve Sükroz içeren sulandırıcıya kolesterol ilavesinin dondurma sırasındaki koruyucu etkisi ve çözüm sonu spermatolojik parametreler üzerine etkinliÄŸinin araÅŸtırılmasıdır. Çalışmada toplam 5 baÅŸ Kıvırcık ırkı koç ve bu koçlardan elektro-ejakulatör kullanılarak toplanan ejakülatlar kullanıldı. Alınan sperma örnekleri motilite ve anormal spermatozoon oranları yönünden muayene edildi. Toplanan ejekülat spermatozoon yoÄŸunlukları hemositometrik yöntemle belirlendi, ejekülatlar biri CLC içermeyen grup diÄŸeri de CLC (120x106 spermatozoon /3mg) içeren grup olmak üzere 2 eÅŸit kısma ayrıldı. 35oC de 15 dk ð€ƒ¸ï¿½nkübasyondan sonra CLC içeren ve CLC içermeyen grupları her ikisi de 3 alt gruba ayrıldı. Bu alt gruplar fruktoz, sükroz ve trehaloz solüsyonlarıyla sulandırıldı ve payetlere çekildi. Payetler equlibrasyon iÅŸlemi için beklemeye bırakıldı. Equlibrasyon iÅŸleminden sonra payetler sıvı azot buharında dondurularak sıvı azotun içinde saklandı. Çözülen payetlerden spermatozoa motilitesi, ölü-canlı ve anormal spermatozoon oranları, spermatozoon membran bütünlüğünü ve prematüre akrozom reaksiyonuna giren spermatozoon oranlarının belirlenmesi amacıyla örnekler alındı. Yapılan çözüm sonu muayeneler sonucunda motilite açısından ÅŸeker grupları arasında istatiksel bir farklılık görülmezken en iyi sonuçlar CLC içeren CLC-trehaloz (%54.5±3.28) ve CLC-fruktoz (%54±2.86) gruplarında elde edildi. Canlı spermatozoon oranlarında ise CLC içeren fruktoz ve sükroz grubunun CLC içermeyen fruktoz ve sukroz grubuyla arasında istatiksel bir farklılık gözlendi (P<0.05). Anormal spermatozoon oranlarında ise gruplar arası fark bulunmadı. SaÄŸlam plazma membranına sahip spermatozoon oranı ve canlı-saÄŸlam plazma membranına sahip spermatozoon oranları açısından CLC-trehaloz grubunda bulundu. Prematüre akrozom reaksiyonuna giren spermatozoon oranları CLC içeren ÅŸeker gruplarında CLC içermeyen gruplara göre önemli derecede düşük bulundu. CLC içeren ve CLC içermeyen gruplar arasındaki fark istatiksel olarak önemli bulundu (P<0.05). Sonuç olarak, kullanılan ÅŸekerlerin bazı parametreler üzerine etkisi önemli olmakla beraber CLC’nin koruyucu etkisinin çok daha belirgin olduÄŸu saptandı.