Resveratrolün hücresel yaşlanmanın indüklenmesi ve sirtüinlerin aktivasyonunda rolünün insan dermal fibroblastlarında araştırılması

Abstract

Resveratrolün çeşitli model organizmalarda (NAD)-bağımlı histon deasetilaz ailesi sirtüinlerin üyesi olan Sirt1' i aktive ederek yaşam süresini uzattığı bilinmektedir. Ancak resveratrolün hücresel düzeyde hücre döngüsünü durdurduğu, erken yaşlanmaya ve apoptozise yol açtığı bilindiği için yaşlanmayı engelleyici etkileri tartışmalı hale gelmiştir. Bu nedenle bu çalışmada, resveratrolün insan normal dermal fibroblastlarında (BJ) yaşlanma üzerine olası etkilerinin ve sirtüinlerle olan ilişkisinin araştırılması amaçlanmıştır. Resveratrolün 72 saatlik inkübasyon sonrasında 25 ''' dan itibaren BJ hücre proliferasyonunu azalttığı WST-1 ve BrdU testleriyle saptanmış ve Ki-67 immün boyama yöntemiyle de bu sonuç desteklenmiştir. Resveratrolün 25, 50 ve 100 'M konsantrasyonlarda ise hücresel yaşlanmayı indüklediği Saß-Gal boyaması ile gösterilmiştir. Bunun yanısıra resveratrolün yüksek konsantrasyonlarda (300 'M ) hücre ölümüne neden olduğu TUNEL boyamasıyla belirlenmiştir. Sirt1, 2, 3, 6 ve 7' nin ifadelerinin Western Blot yöntemiyle analiz edilmesi sonucunda ise hücresel yaşlanmanın görüldüğü dozlarda Sirt1 ve 2' nin ifadesinde azalma olduğu ancak Sirt3, 6 ve 7' nin ifadelerinde ise değişiklik olmadığı bulunmuştur. Sonuç olarak resveratrolün doza ve zamana bağlı olarak hücresel yaşlanmayı indüklediği ve buna bağlı olarak Sirt1 ve 2' nin ifadelerinin azaldığı bulunmuştur.

In model organisms resveratrol extends lifespan via activating Sirt1 which is a member of NAD+ dependent histone deacetylase family, sirtuins. On the other hand resveratrol also induces the cell cycle arrest and leads to premature senescence and apoptosis in vitro that makes the inhibitory effects of resveratrol on aging controversial. Thus, in this study the potential effects of resveratrol on human normal skin fibroblasts and the relationship between resveratrol and sirtuins were examined. As determined by WST-1 and BrdU tests, starting from 25 '', resveratrol reduced cell viability. Ki-67 immunostaining results also supported this finding. In addition, utilizing Saß-Gal staining it was found that resveratrol induced cellular senescence at 25, 50 and 100 'M concentrations. Accordingly, resveratrol caused cell death / apoptosis at high concentratitons such as 300 'M as determined by TUNEL staining. To answer the question whether resveratrol activates sirtuin expression or not, expression of Sirt1, 2, 3, 6 and 7 were examined. As shown by WB analysis at concentrations where resveratrol induced cellular senescence the expression of Sirt1 and 2 were decreased whereas Sirt3, 6 and 7 did not change. Hence, this study shows that resveratrol induced cellular senescence in a time and dose dependent manner and accordingly reduced the expression of Sirt1 and 2.