BAZAL VE GENOTOKSİK STRES KAYNAKLI OTOFAJİNİN MEME KANSERİ KEMOTERAPİ DİRENCİNDE ROLÜNÜN VE MEKANİZMASININ ARAŞTIRILMASI

Abstract

Amaç: Bu çalışma, meme kanseri hücre hattı MCF-7’de Wip1 fosfatazının otofaji, DNA hasar yanıtı (DNA Damage Response/DDR) ve hücresel süreçler üzerindeki etkilerini araştırmayı amaçlamaktadır. Çalışma, genotoksik stres koşullarında onkogenik Wip1’in otofaji mekanizmalarını düzenleme potansiyelini, kemoterapiye direnç mekanizmalarının anlaşılmasını ve kanser tedavilerinde yeni hedeflerin belirlenmesini amaçlamaktadır. Gereç ve Yöntem: MCF-7 hücrelerinde genotoksik ajan etoposid (ETO), otofaji inhibitörü klorokin (CQ) ve Wip1 inhibitörü GSK 2830371 (GSK) kullanılarak tekli ve kombinasyon tedavileri uygulanmıştır. DDR yolunun aktivasyonu, DNA hasar yanıtı proteinleri, hem bazal otofaji hem de genotoksik stres indüklü otofaji aktivasyonları Wip1, LC3 I-II ve P62 proteinleri, Wip1-ULK1 etkileşimi fosforile ULK1 bölgesi (Ser-638 ve Ser-757) düzeyleri ve hücresel süreçteki proteinler western blot analizleri ile belirlenmiştir. Tedavi şartlarındaki hücrelerin hücresel yanıtları ayrıca Annexin/V, hücre döngüsü, senesens (SA-β-Gal boyama) ve hücrelerin göç kapasitesi yara iyileştirme analizleriyle belirlenmiştir. Bulgular: Wip1 fosfatazının otofaji ve DNA hasar yanıtındaki düzenleyici rolü, genotoksik stres koşullarında hücre kaderini şekillendiren kritik bir unsur olarak belirlenmiştir. Wip1’in inhibisyonu ve otofajinin baskılanması, hücre apoptozunda artışa yol açmıştır ve hücre döngüsü durmasına yol açarak senesense aracılık etmiştir. Aynı koşullarda, yara iyileşmesi analizi ile hücre göçünün baskılandığı da açıkça belirlenmiştir. Bu sonuçlar, Wip1-ULK1 ekseninin ve otofaji hedefli tedavilerin, kanser kemoterapisinde direnç mekanizmalarını aşmak için terapötik bir strateji olarak kullanılabileceğini göstermektedir. Sonuç: Çalışmamız, genotoksik stres kaynaklı otofaji aktivasyonunun diğer hücresel mekanizmalar üzerinde etkili rolünü göstermektedir ve daha detaylı incelenmesi için bir temel sunmaktadır.