Please use this identifier to cite or link to this item:
http://hdl.handle.net/11607/5468Full metadata record
| DC Field | Value | Language |
|---|---|---|
| dc.contributor.advisor | KILIÇ EREN, MEHTAP | - |
| dc.contributor.author | Ak, Ceylan | - |
| dc.date.accessioned | 2026-03-18T12:33:56Z | - |
| dc.date.available | 2026-03-18T12:33:56Z | - |
| dc.date.issued | 2026 | - |
| dc.date.submitted | 2026-01-01 | - |
| dc.identifier.citation | Ak, Ceylan. (2026). Bazal Ve Genotoksik Stres Kaynaklı Otofajinin Meme Kanseri Kemoterapi Direncinde Rolünün Ve Mekanizmasının Araştırılması. Aydın Adnan Menderes Üniversitesi, Sağlık Bilimleri Enstitüsü (Yayımlanmamış Doktora Tezi), Aydın. | tr_TR |
| dc.identifier.uri | http://hdl.handle.net/11607/5468 | - |
| dc.description.abstract | Amaç: Bu çalışma, meme kanseri hücre hattı MCF-7’de Wip1 fosfatazının otofaji, DNA hasar yanıtı (DNA Damage Response/DDR) ve hücresel süreçler üzerindeki etkilerini araştırmayı amaçlamaktadır. Çalışma, genotoksik stres koşullarında onkogenik Wip1’in otofaji mekanizmalarını düzenleme potansiyelini, kemoterapiye direnç mekanizmalarının anlaşılmasını ve kanser tedavilerinde yeni hedeflerin belirlenmesini amaçlamaktadır. Gereç ve Yöntem: MCF-7 hücrelerinde genotoksik ajan etoposid (ETO), otofaji inhibitörü klorokin (CQ) ve Wip1 inhibitörü GSK 2830371 (GSK) kullanılarak tekli ve kombinasyon tedavileri uygulanmıştır. DDR yolunun aktivasyonu, DNA hasar yanıtı proteinleri, hem bazal otofaji hem de genotoksik stres indüklü otofaji aktivasyonları Wip1, LC3 I-II ve P62 proteinleri, Wip1-ULK1 etkileşimi fosforile ULK1 bölgesi (Ser-638 ve Ser-757) düzeyleri ve hücresel süreçteki proteinler western blot analizleri ile belirlenmiştir. Tedavi şartlarındaki hücrelerin hücresel yanıtları ayrıca Annexin/V, hücre döngüsü, senesens (SA-β-Gal boyama) ve hücrelerin göç kapasitesi yara iyileştirme analizleriyle belirlenmiştir. Bulgular: Wip1 fosfatazının otofaji ve DNA hasar yanıtındaki düzenleyici rolü, genotoksik stres koşullarında hücre kaderini şekillendiren kritik bir unsur olarak belirlenmiştir. Wip1’in inhibisyonu ve otofajinin baskılanması, hücre apoptozunda artışa yol açmıştır ve hücre döngüsü durmasına yol açarak senesense aracılık etmiştir. Aynı koşullarda, yara iyileşmesi analizi ile hücre göçünün baskılandığı da açıkça belirlenmiştir. Bu sonuçlar, Wip1-ULK1 ekseninin ve otofaji hedefli tedavilerin, kanser kemoterapisinde direnç mekanizmalarını aşmak için terapötik bir strateji olarak kullanılabileceğini göstermektedir. Sonuç: Çalışmamız, genotoksik stres kaynaklı otofaji aktivasyonunun diğer hücresel mekanizmalar üzerinde etkili rolünü göstermektedir ve daha detaylı incelenmesi için bir temel sunmaktadır. | tr_TR |
| dc.description.tableofcontents | İÇİNDEKİLER KABUL VE ONAY .................................................................................................................... i TEŞEKKÜR ............................................................................................................................... ii İÇİNDEKİLER .......................................................................................................................... iii SİMGELER VE KISALTMALAR DİZİNİ .............................................................................. vi ŞEKİLLER DİZİNİ ................................................................................................................... ix RESİMLER DİZİNİ .................................................................................................................. xi TABLOLAR DİZİNİ ............................................................................................................... xii ÖZET ....................................................................................................................................... xiii ABSTRACT ............................................................................................................................ xiv GİRİŞ ................................................................................................................................. 1 GENEL BİLGİLER ............................................................................................................ 5 2.1. DNA Hasar Yanıtı (DNA Damage Response (DDR)) ve Stres Faktörleri ......................... 5 2.2. Wip1 Fosfataz ..................................................................................................................... 9 2.2.1. Wip1’in İnsan Kanserlerindeki Onkojenik Rolü ............................................................ 11 2.2.2. Wip1 ve Hücre Döngüsü Durdurulması İlişkisi ............................................................. 12 2.2.3. Wip1 ve apoptoz ilişkisi ................................................................................................. 13 2.2.4. Wip1 ve hücresel senesens ilişkisi ................................................................................. 14 2.2.5. Kanserde Terapötik Hedef Olarak Wip1 ........................................................................ 15 2.3. Otofaji ................................................................................................................................ 17 2.3.1. Makrootofaji ve Moleküler Mekanizmaları ................................................................... 18 2.3.2. Genotoksik Stres Kaynaklı Otofaji ve Wip1’in Rolü ..................................................... 20 2.3.3. Kemoterapi Direncinde Otofajinin Rolü ve Terapötik Hedeflenmesi ........................... 23 2.4. Meme Kanseri ................................................................................................................... 24 2.4.1. Meme Kanseri ve Otofaji İlişkisinde Wip1’in Rolü ...................................................... 25 2.5. Amaç ve Hedef .................................................................................................................. 27 GEREÇ VE YÖNTEM .................................................................................................... 29 3.1. GEREÇ ......................................................................................................................... 29 3.1.1. Hücre Hatları .................................................................................................................. 29 3.1.2. Kitler, Besiyerleri ve Kimyasallar .................................................................................. 30 3.1.3. Çalışmada Kullanılan Antikorlar ................................................................................... 32 3.1.4. Cihazlar ve Diğer Malzemeler ....................................................................................... 33 iv 3.2. YÖNTEM .......................................................................................................................... 34 3.2.1. Hücre Kültürü Ortamı ve Koşulları ................................................................................ 34 3.2.2. Dondurulmuş Hücreleri Çözme ..................................................................................... 35 3.2.3. Hücrelerin Thoma (Neubauer) lamı ile Sayımı .............................................................. 36 3.2.3.1. Hücre konsantrasyonunun hesaplanması: ................................................................... 36 3.2.4. Hücrelerin Pasajlanması ................................................................................................. 37 3.2.5. Hücrelerin Dondurulması ............................................................................................... 38 3.2.6. İlaç Stoğu Hazırlığı ve Konsantrasyonları ..................................................................... 38 3.2.7. Annexin V / 7-AAD Apoptoz Testi ............................................................................... 39 3.2.7.1. Hücrelerin hazırlığı ve Annexin V/ 7AAD reaktif uygulanması ................................ 40 3.2.8. Hücre Döngüsü Analizi Deneyi ..................................................................................... 40 3.2.9. SA-β-gal (Senescence-Associated Beta-Galactosidase) Boyama Analizi ..................... 41 3.2.10. Western Blot Protein Tespit Etme Analizi ................................................................... 43 3.2.10.1. Western Blot Çalışmasında Kullanılan Solüsyonlar ve Tamponlar .......................... 44 3.2.10.2. Lizat Hazırlama ve Protein Ekstraksiyonu Solüsyonları ........................................... 44 3.2.10.3. Protein Ekstraksiyonu Hazırlama .............................................................................. 45 3.2.10.4. BCA Testi ile Protein Miktar Analizi ....................................................................... 45 3.2.10.5. SDS-PAGE (Sodyum Dodesil Sülfat Poliakrilamid Jel Elektroforezi) .................... 46 3.2.10.5.1. SDS-PAGE Jel Hazırlığı ........................................................................................ 46 3.2.10.6. Loading (Yükleme) Hazırlığı .................................................................................... 48 3.2.10.7. Running (Yürütme) İşlemi ........................................................................................ 48 3.2.10.8. Semi-Dry (yarı-kuru) Transfer İşlemi ....................................................................... 48 3.2.10.9. Bloklama İşlemi ........................................................................................................ 49 3.2.10.10. Antikor İnkübasyon Adımları ................................................................................. 50 3.2.10.11. Görüntüleme ............................................................................................................ 50 3.2.11. Yara İyileştirme (Wound Healing) Deneyi .................................................................. 50 3.2.12. İstatistiksel Analizler .................................................................................................... 51 BULGULAR .................................................................................................................... 52 4.1. MCF-7 ve MCF-12A Hücrelerinde Bazal ve Genotoksik Stres Kaynaklı Otofaji Aktivasyonu ............................................................................................................................. 52 4.2. MCF-7 Hücrelerinde Genotoksik Stres Kaynaklı DNA Hasarı Proteinlerinin Aktivasyonu .................................................................................................................................................. 58 4.3. Otofaji Aktivasyonunda WIP1-ULK1 İlişkisi ................................................................... 64 v 4.4. Bazal ve Genotoksik Stres İndüklü Otofaji Aktivasyonunun Apoptoz İndüksiyonunda Etkisinin İncelenmesi ............................................................................................................... 69 4.4.1. Apoptotik Hücre Ölümünün Annexin V/7-AAD Analiziyle Tespiti ............................. 69 4.5. Otofaji Aktivasyonunun Hücre Döngüsü ve Senesense Etkisinin İncelenmesi ................ 84 4.5.1. MCF-7 Hücrelerinde Otofajinin Hücre Döngüsü Üzerine Etkileri ................................ 84 4.5.2. Otofajinin Hücresel Senesens Üzerindeki Etkileri ......................................................... 86 4.5.2.1. Senesens İndüksiyonunun Hücre Döngüsü Analizi ile Tespiti ................................... 86 4.5.2.2. Senesense Aracılık Eden Proteinlerin WB Analizi ile Tespiti .................................... 88 4.5.2.3. Senesens İndüksiyonunun β-galaktosidaz Boyama ile Tespiti ................................... 93 4.6. MCF-7 Hücreleri Göç Kapasitesinin Yara İyileşmesi Testi ile Belirlenmesi .................. 95 4.6.1. Yara İyileşmesi (Wound Healing) Deneyi ..................................................................... 95 TARTIŞMA ..................................................................................................................... 98 5.1. Bazal koşullarda ve Genotoksik Streste Otofaji İndüksiyonu ........................................... 98 5.2. Etoposid Kaynaklı Genotoksik Streste DDR Yolunun Aktivasyonu .............................. 100 5.3. Otofaji Aktivasyonunda Wip1-ULK1 İlişkisi ................................................................. 101 5.4. Genotoksik Stres İndüklü Otofaji İnhibisyonunun Kemoterapi Cevaplarına Etkisi ....... 104 5.4.1. Otofajinin Apoptozisteki Etkileri ................................................................................. 104 5.4.2. Otofajinin Hücre Döngüsü Durdurulmasına ve Senesens İndüksiyonuna Etkileri ...... 106 5.4.3. Otofajinin Kemoterapi Direncinde Hücre Göçü Kapasitesine Etkileri ........................ 109 SONUÇ VE ÖNERİLER ............................................................................................... 111 KAYNAKLAR ....................................................................................................................... 115 EKLER ................................................................................................................................... 131 Ek 1. Apoptotik Hücrelerin (Annexin V/7AAD) Deney Gruplarına Ait İstatistiksel Analiz Veri Tabloları ................................................................................................................................. 131 Ek 2. 72 saat Hücre Döngüsü (Cell Cycle) Dağılımlarına Ait İstatistiksel Analiz Veri Tabloları ................................................................................................................................................ 134 Ek 3. Western Blot Deney Gruplarına Ait İstatistiksel Analiz Veri Tabloları ....................... 137 EK 4. Yara İyileşmesi (Scratch) Densitometrik Analizine Ait Tek Yönlü ANOVA ve Bonferroni Çoklu karşılaştırma Testi Sonuçları ..................................................................... 148 ÖZ GEÇMİŞ .......................................................................................................................... 151 | tr_TR |
| dc.language.iso | tur | tr_TR |
| dc.publisher | AYDIN ADNAN MENDERES ÜNİVERSİTESİ SAĞLIK BİLİMLERİ ENSTİTÜSÜ | tr_TR |
| dc.rights | info:eu-repo/semantics/embargoedAccess | tr_TR |
| dc.subject | DDR, Wip1 fosfataz, Otofaji, Wip1-ULK1 ekseni, Kemoterapi direnci | tr_TR |
| dc.title | BAZAL VE GENOTOKSİK STRES KAYNAKLI OTOFAJİNİN MEME KANSERİ KEMOTERAPİ DİRENCİNDE ROLÜNÜN VE MEKANİZMASININ ARAŞTIRILMASI | tr_TR |
| dc.type | doctoralThesis | tr_TR |
| dc.contributor.department | SAĞLIK BİLİMLERİ ENSTİTÜSÜ | tr_TR |
| Appears in Collections: | Doktora | |
Files in This Item:
| File | Description | Size | Format | |
|---|---|---|---|---|
| Ceylan_ak_doktora.pdf | Doktora Tez Dosyası | 7.76 MB | Adobe PDF | View/Open Request a copy |
Items in DSpace are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.