Akciğer kanseri hücre modelinde karsinogenez ilişkili hedef mikroRNA belirlenmesi ve RNA interferans aracılığıyla fonksiyonel etkisinin araştırılması

Abstract

Amaç: Akciğer kanseri, dünya genelinde kansere bağlı ölümlerin en yaygın nedenlerinden biridir. Mevcut durumda uygulanan kemoterapi ve radyoterapi gibi konvansiyonel tedavilere karşı gelişen direnç ve metastatik hastalıklarda tedavi başarısının sınırlı olması, klinik sonuçların olumsuz seyretmesine neden olmaktadır. Bu durum, akciğer kanserine yönelik daha etkili ve hedefe yönelik tedavi yaklaşımlarının geliştirilmesini zorunlu kılmaktadır. Gen susturma, kanser tedavisinde moleküler hedeflere yönelik özgün müdahaleler sunarak önemli bir potansiyel taşımaktadır. Bu çalışmada, akciğer kanseri hücre modeline karsinogenez ile ilişkili hedef miRNA belirlenmesi ve RNA interferans aracılığıyla bu hedeflerin fonksiyonel etkilerinin araştırılması amaçlanmıştır. Gereç ve Yöntem: Çalışmada miTED veritabanı aracılığıyla potansiyel tedavi hedefi oluşturabilecek aday miRNA tespiti sağlanmıştır. Belirlenen miRNA’nın ekspresyon düzeyi A549 ve T2A hücre hatları kullanılarak qPCR ile valide edilmiştir. Ardından, seçilen hedef miRNA’nın hem sağlıklı hem de akciğer kanseri hücre modellerinde anti-miRNA uygulaması ile susturulmasıyla beraber, bu müdahalenin, hücre canlılığı, apoptoz ve konvansiyonel kemoterapik ajan olan sisplatine karşı duyarlılık üzerindeki etkileri değerlendirilmiştir. Bulgular: miTED veri tabanından elde edilen in siliko analizlerde, miR-146a-3p’nin kanser dokularında sağlıklı dokulara göre 5,19 kat yüksek ifade edildiği belirlenmiştir. Sağlıklı hücrelere göre A549 hücre hattında miR-146a-3p'nin ifadesi 4,86 kat daha yüksek olduğu belirlenmiştir. A549 hücrelerinde miR-146a-3p’nin susturulması apoptoz oranını yaklaşık %20 artırmıştır. Sisplatin ile birlikte uygulandığında, apoptotik hücre oranında ek %11’lik bir artış xiii gözlenmiş, bu da tedaviye duyarlılığın arttığını göstermiştir. Hücre döngüsü analizlerinde ise bu kombinasyonun A549 hücrelerini G2/M fazında anlamlı düzeyde biriktirdiği ve hücrelerin mitoz öncesi kontrol noktasında durdurulduğu belirlenmiştir. Sonuç: Bu sonuçlar, miR-146a-3p’nin akciğer kanserinde onkojenik olabileceğini ve sisplatin tedavisine duyarlılığı artıran potansiyel bir moleküler hedef olabileceğini göstermektedir.