Theileria annulata’nın Kenelere Aktarımını Engelleyebilecek Antijen Adaylarının İn vivo İncelenmesi

Abstract

Amaç: Bu çalışmada, daha önceden tanımlanmış antijen adaylarının (TA17050, TA20855, TA03640, TA10955) T. annulata'nın Hyalomma excavatum kenelerine bulaşmasını engelleme potansiyelinin araştırılması amaçlanmıştır. Gereç ve Yöntem: TA17050, TA20855, TA03640 ve TA10955 gen bölgeleri klonlanarak ilgili proteinler rekombinant olarak üretilmiştir. Takiben dört farklı deney grubu oluşturulmuş ve her bir deney grubundaki hayvanlara ayrı ayrı rekombinant proteinler ve adjuvan karışımı 21 gün arayla iki kez 500 µg dozlarda enjekte edilerek hayvanlar immunize edilmiştir. Kontrol grubundaki hayvanlara PBS + adjuvan karışımı enjekte edilmiştir. Rekombinant proteinlere karşı gelişen bağışık yanıt düzeyleri tüm hayvanlardan alınan serum örnekleri kullanılarak western blot yöntemi ile değerlendirilmiştir. İmmunizasyon sonrası deney ve kontrol grubundaki hayvanlar T. annulata Ankara 279 sporozoite stabilatı ile enfekte edilmiştir. İmmunizasyon ve enfeksiyon boyunca hayvanların tam kan analizleri ve parazitolojik muayeneleri gerçekleştirilmiştir. Antijen adaylarının parazitin kenelere aktarılmasını engelleyebilmedeki etkinliği, deneysel enfeksiyon sonrası hayvanlar üzerinde beslenen H. excavatum kenelerindeki enfekte tükürük bezi asini hücreleri sayılarak araştırılmıştır. Bulgular: Western blot analizleri, deney grubundaki buzağıların ilgili rekombinant proteinler ile başarıyla immunize edildiklerini göstermiştir. Kontrol gruplarında ise proteinlere karşı gelişmiş bir immun yanıt tespit edilmemiştir. İmmunizasyon sonrasında hayvanların beden ısılarında ve tam kan değerlerinde önemli değişiklikler tespit edilmemiş, ancak enjeksiyon yerlerinde lokal reaksiyonlar gelişmiş ve şişkinlikler oluşmuştur. Sporozoit enfeksiyonu sonrasında ise tüm hayvanlarda şiddetli klinik belirtiler gözlenmiştir. Tükrük bezi asini hücrelerinde tespit edilen ortalama enfeksiyon oranı Tams1 ile immunize edilen hayvanlarda %78,12, kontrol grubunda ise bu oran %82,72 olarak belirlenmiştir. TA03640_F1.3, TA10955_F1.2 ve TA20855 rekombinant proteinleri ile immunize edilen hayvanların tükürük bezlerindeki ortalama enfeksiyon oranları sırasıyla %59,44, %26,41 ve %26,24, kontrol gruplarında ise sırasıyla %51,87, %12,56 ve %36,63 olduğu tespit edilmiştir. Sonuç: Yapılan analizlerde kene tükürük bezi enfeksiyon oranlarının deney ve kontrol grubundaki hayvanlar arasında istatistiksel olarak anlamlı bir fark oluşturmadığı görülmüştür. TA17050, TA03640, TA10955, TA20855 gen bölgeleri tarafından kodlanan proteinlerin in vivo iletimi bloke etme etkinliğinin istenen düzeyde olmadığı belirlenmiştir.