Please use this identifier to cite or link to this item:
http://hdl.handle.net/11607/4817
Title: | Aşı adayı norovirüs antijenlerinin klonlanması ve immünojenitelerinin araştırılması |
Other Titles: | Cloning of vaccine candidates norovirus antigens and investigation of their immunogenities |
Authors: | Başbülbül, Gamze Yalçın Bingül, Demet Aydın Adnan Menderes Üniversitesi, Fen Bilimleri Enstitüsü, Biyoloji Doktora Programı |
Keywords: | Norovirüs, Escherichia coli, Rekombinant Protein Üretimi, Klonlama, İmmun yanıt Norovirus, Escherichia coli, Recombinant Protein Production, Cloning, Immune response |
Issue Date: | 2022 |
Publisher: | Aydın Adnan Menderes Üniversitesi, Fen Bilimleri Enstitüsü |
Citation: | Yalçın Bingül, D. (2022). Aşı adayı norovirüs antijenlerinin klonlanması ve immünojenitelerinin araştırılması. (Yayımlanmamış Doktora Tezi). Aydın Adnan Menderes Üniversitesi, Fen Bilimleri Enstitüsü: Aydın. |
Abstract: | Amaç: Bu araştırma Norovirüs’ e ait aşı adayı olabilecek antijenik proteinlerin rekombinant
olarak elde edilmesi ve oluşabilecek immün yanıtın hayvan denemeleri ile araştırılması
amacıyla yapılmıştır.
Materyal ve Yöntem: Nöroviruse ait VP1, VP2, p22 ve polipeptid (EP123) dizileri spesifik
primerlerle PCR’ da çoğaltılmıştır. Amplikonlar, pET-30a (+) ekspresyon vektörüne
yerleştirildikten sonra E. coli BL21 suşuna transformasyonla aktarılmıştır. Rekombinant olarak
üretilen proteinler, His-tag kuyruğu yardımıyla ve amonyum sülfatla kısmi olarak
saflaştırıldıktan sonra immünizasyon için antijen olarak kullanılmıştır. Aşılanan farelerin serum
örneklerinden Norovirüse karşı oluşan antikor cevabı indirekt ELISA yöntemiyle saptanmıştır.
Bulgular: E. coli’ ye transformasyonla aktarılan genlerin varlığı sekans analizi ile
doğrulanmıştır. His-tag kuyruğu ve amonyum sülfatla çöktürme işlemi proteinlerin kısmi olarak
saflaştırılması için yeterli olmuştur. Sadece VP1 proteini yeterli düzeyde immün yanıt
oluşturmuştur.
Sonuç: Bu tez kapsamında, VP1 ve VP2 proteinlerine ek olarak, önceki Nörovirus aşı
çalışmalarından farklı, ilk defa epitoplardan oluşan bir polipeptit ve Norovirüsün yapısal
olmayan bir geni (p22) rekombinant olarak üretilmiş ve immünojenitesi araştırılmıştır. VP1
dışındaki rekombinant proteinlerde yeterli immunojenik yanıtın oluşmamasının, kullanılan doz,
bağışıklama sayısı veya adjuvan uygulaması ile ilgili olabileceği düşünülmüştür. Objective: This research was carried out in order to obtain recombinant antigenic proteins that can be vaccine candidates of Norovirus and to investigate the immune response that may occur with animal experiments. Material and Methods: The VP1, VP2, p22 and polypeptide (EP123) sequences of the norovirus were amplified in PCR with specific primers. Amplicons were transformed into E. coli BL21 strain after insertion into the pET-30a (+) expression vector. Recombinantly produced proteins were used as antigens for immunization after partial purification with the help of His-tag tail and ammonium sulfate. Antibody response to Norovirus from serum samples of vaccinated mice was determined by indirect ELISA method. Results: The presence of genes transferred by transformation into E. coli was confirmed by sequence analysis. His-tag tail and precipitation with ammonium sulfate were sufficient for partial purification of the proteins. Only the VP1 protein elicited an adequate immune response. Conclusion: In this thesis, in addition to VP1 and VP2 proteins, a polypeptide consisting of epitopes different from previous Norovirus vaccine studies, and a non-structural gene (p22) of Norovirus were produced recombinantly and its immunogenicity was investigated. It was thought that the lack of adequate immunogenic response in recombinant proteins other than VP1 may be related to the dose used, the number of immunizations or the adjuvant administration. |
URI: | http://hdl.handle.net/11607/4817 |
Appears in Collections: | Doktora |
Files in This Item:
File | Description | Size | Format | |
---|---|---|---|---|
DemetYalçınBingülDRTez.pdf | Demet Yalçın Bingül Doktora Tez Dosyası | 3.08 MB | Adobe PDF | View/Open |
Items in DSpace are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.