Pamuk solgunluk hastalık etmeni Verticillium dahliae'da belirlenen mikoviral dsRNA'nın tanılanması ve virülenslik etkisinin belirlenmesi

Abstract

Amaç: Bu çalışma Aydın ilinde pamukta saptanan Verticillium dahliae'ya ait dsRNA'nın tanısının yapılması amacıyla ele alınmıştır. Materyal ve Yöntem: Aydın ilinden elde edilen stok olarak bulunan V. dahliae izolatları ve Aydın ilinde pamuk üretiminin yoğun olarak yapıldığı Söke ilçesinden Verticillium solgunluk belirtileri gösterdiği tahmin edilen 76 adet pamuk dal örneğinden 33'nün V. dahliae olduğu belirlenmiştir. V. dahliae izolatlarından dsRNA analizleri Balija vd. (2008)'e göre yapılarak izolatlarda mikoviral dsRNA belirlenmiş ve tek basamaklı RT-PCR yöntemi ile tanısı yapılmıştır. Bulgular: Elde edilen 20 ile 1 kb arasında profil boyutlarında dsRNA'ların tanısında Çin'de V. dahliae enfekteli pamuk bitkisinden izole edilmiş (Feng vd., 2013) Verticillium dahliae partitivirus 1'in NCBI'daki nükleotit dizisi kullanılarak tasarlanan Primer 3 programı ile primer çifti kullanılarak tanılanmıştır. dsRNA içeren ve içermeyen V. dahliae fungal izolatlarının virulenslikleri arasındaki farkların belirlenmesi için gövde enjeksiyon ve kök daldırma yöntemleri sonucu mikoviral dsRNA içeren fungal izolatlardan (650) birisinin dsRNA virülensliğinin en düşük, ikisinin (N34, N40) ise en yüksek olduğu SPSS analizi sonucu ile belirlenmiştir. Pozitif sonuç alınan dsRNA örneklerinden agar jel elektroforezde en net bant profili veren ve patojenisite denemesinde en iyi sonuç alınan 5 adet izolalat seçilerek sekans dizi analizi yapılmıştır. Sonuç: Elde edilen dsRNA dizilerinin BLAST ve MEGA analizleri sonucunda Aydın ilinde saptanan dsRNA örneklerinin Feng vd. (2013) ve Canizares vd. (2015)'in çalışmalarındaki Verticillium dahliae partitivirus 1 ve Verticillium dahliae partitivirus ol-1 olarak isimlendirilen mikovirüslere ortalama %94 ile 98 oranlarında benzer olduğu tespit edilmiştir.

Objective: This study was carried out in order to diagnose the mycovirus of Verticillium dahliae detected in cotton at Aydın province. Material and Methods: V. dahliae isolates found as stock obtained from Aydın province A total of 76 cotton branch samples were collected from Söke district in Aydın province where cotton production is intense. These samples were isolated and 33 isolates were determined to be V. dahliae. dsRNA analyzes of all isolates were performed by Balija et al. (2008) mycovirus dsRNA detection was performed. Results: Mycoviral dsRNA analysis was performed from V. dahliae isolates obtained from the districts of Aydın where cotton production is intense fort the identification of the dsRNAs obtained by RT-PCR method firstly, Verticillium dahliae Partitivirus 1 which was isolated from V.dahliae infected cotton plant in China (Feng et al., 2013) was primer paired with the Primer 3 program using the nucleotide sequence in NCBI was designed. The resulting V.dahliae infected dsRNA isolates gave a positive reaction in one-step RT-PCR using the designed primer. As result of both stem injection and root immersion methods used to determine the differences between the virulence of V.dahliae fungal isolates with and without dsRNA it was determined by SPSS that one of the funga isolates (650) containing mycoviral dsRNA had the lowest virulence and the two (N34, N40) had the highest. Sequence analysis was performed by selecting 5 isolates from the dsRNA samples with positive results which gave the clearest band profile in agar jel electrophoresis and got the best results in the pathogenicity test. Conclusion: As a result of the BLAST and MEGA analyzes of the obtained dsRNA sequences the dsRNA samples detected in Aydın province were determined by Feng et al. (2013) and Canizares et al. (2015) were found to be similiar to the mycoviruses named V.dahliae partitivirus 1 and V. dahliae partitivirus ol-1 in their studies with an average of %94 to %98.