Kültürden bağımsız metotlarla aydın ili ve çevresindeki sıcak su kaynaklarında siyanobakteri çeşitliliğin belirlenmesi

Abstract

Amaç: Bu tezin amacı, Aydın ili ve çevresindeki kaplıcalardan kültürden bağımsız yöntemlerle siyanobakteri çeşitliliğini belirlemektir. Materyal ve Metodlar: Toplam genomik DNA'lar su, çamur veya toprak örneklerinden izole edildi ve ekstrakte edilmiş çevresel DNA'lardan 16S rDNA genleri PCR yöntemi ile amplifiye edildi. Amplikonlar daha sonra E.coli hücrelerine klonlandı, mavi-beyaz koloniler arasından transforme olmuş beyaz koloniler seçildi ve M13 primerleri kullanılarak PCR reaksiyonları yapıldı. M13 PCR ile elde edilen amplikonlar dizilendi ve GenBank veri tabanında BLAST analizine göre diğer bakteriyal gruplar ile olan homolojiler belirlendi. Bulgular: Klonlama sonucu elde edilen fragmanların toplam sayısı 298 olup, yapılan sekans analizi sonucunda 201 tanesinin siyanobakteriler ile, 97 tanesinin ise diğer bakteriyal filumlar ile en yüksek homolojileri gösterdikleri belirlenmiştir. BLAST analizi sonucu bulunan yüzde özdeşlik %78 ila %100 aralığındadır. En sık tespit edilen taksonlar, Planktothricoides raciborskii, Trichocoleus desertorum, Spirulina subsalsa, Gleobacter violaceus, Leptolyngbya laminosa, Synechococcus sp. ve Alkalima pantanalense olarak belirlenmiştir. Sonuç: Çalışmamız, Türkiye'de Aydın İli ve çevresindeki termal ortamlardan termofilik siyanobakterilerin belirlenmesinde kültürden bağımsız bir yaklaşım içermesi açısından önemlidir ve ekstrem habitatlardaki siyanobakteri araştırmalarına yeni bakış açıları sağlayabilir

Objectives: The thesis’s objectives were to determine the cyanobacterial diversity from hot springs around Aydın province and surrounding using culture independent methods. Material and Methods: Total genomic DNAs were isolated from water, mud or soil samples and 16S rDNA genes were amplified from extracted environmental DNAs. Amplicons were then cloned into E.coli cells, transformed cells were chosen and PCR reactions were done using M13 primers. Amplicons obtained by M13 PCR, were sequenced and according to BLAST analyses homologies were determined in GenBank database. Results: In this study we highlighted the Cyanobacterial diversity of hot springs in Aydın and its surroundings using culture independent methods as well as cloning of PCR amplified fragments of 16S rRNA genes. The total number of cloned colonies were 298 of which 201 belonged to Cyanobacteria phylum while 97 other phylum and the percentage identity found were in the range of 78% to 100%. Most abundant species detected were, Planktothricoides raciborskii, Trichocoleus desertorum, Spirulina subsalsa, Gleobacter violaceus, Leptolyngbya laminosa, Synechococcus sp. and Alkalinema pantanalense. Conclusion: Our study is important for being first culture- independent approach to determine thermophilic cyanobacteria from thermal environments in Aydın Province and surrounding area, Turkey and may provide new insights into the Cyanobacteria researches from extreme habitats.