Please use this identifier to cite or link to this item:
http://hdl.handle.net/11607/3797Full metadata record
| DC Field | Value | Language |
|---|---|---|
| dc.contributor.advisor | Dönmez Yalçın, Gizem | - |
| dc.contributor.author | Ak, Ceylan | - |
| dc.date.accessioned | 2020-07-10T10:51:35Z | - |
| dc.date.available | 2020-07-10T10:51:35Z | - |
| dc.date.issued | 2020-07-10 | - |
| dc.date.submitted | 2020-01-10 | - |
| dc.identifier.uri | http://hdl.handle.net/11607/3797 | - |
| dc.description.abstract | ÖZET MPP+ (1-METİL-4-FENİLPRİDİNYUM) İLE MUAMELE SONUCU FARE NÖROBLASTOMA (N2A) HÜCRESİNDE OLUŞACAK EKSİTOTOKSİSİTE DURUMUNUN VE GLT-1 SEVİYELERİNİN ARAŞTIRILMASI AK C. Aydın Adnan Menderes Üniversitesi Sağlık Bilimleri Enstitüsü Tıp Fakültesi Tıbbi Biyoloji Programı Yüksek Lisans Tezi, Aydın, 2020 Parkinson hastalığı, lewy nöritleri ve lewy cisimleri olarak ifade edilen α-sinükleinin intranöronal agregatlarının birikimleri ile substansiya nigra'daki dopamin üreten hücrelerin kaybından ve böylece dopaminerjik nöronların dejenerasyonundan kaynaklanan bir fonksiyon bozukluğu olarak tanımlanır. Eksitotoksisite nörodejenerasyonun ortak moleküler mekanizmalarından biridir. Glutamat eksitotoksisitesi, presinaptik sinir terminallerinden ve astrositlerden intraselüler alana aşırı glutamat salınımının tetiklenmesiyle ve glutamat reseptörlerinin aşırı uyarılmasıyla oluşur. Glutamat taşıyıcıları biriken fazla glutamatı toplayarak glutamat reseptörlerinin aşırı aktivasyonunu önler. Özellikle GLT-1 (Glutamate Transporter-1) ya da EAAT2 (Excitatory Amino Acid Transporter2) beyindeki toplam glutamate emiliminin %95’inden sorumludur. MPTP (1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine), Parkinson hastalığı için önemli bir kimyasal model ve sık kullanılan etkili bir toksindir. Elektron transport zincirindeki Komplex 1’i inhibe ederek mitokondriyal fonksiyona zarar verir. Bu çalışmada MPTP'nin aktif metaboliti MPP+(1-methyl-4-phenylpyridinium) kullanılarak, nöron ve glia hücrelerinde eksitotoksisite modeli oluşturuldu ve MPP+’nin GLT-1 ekspresyonu üzerine etkisi araştırıldı. N2A (fare nöroblastoma hücreleri) ve glia (IHA-immortalized human astrocytes-immortalize olmuş insan astrositleri) MPP+ ile muamele edildikten sonra, hücrelerin canlılık oranları, glutamat salınım oranları ve GLT-1’in mRNA ve protein düzeylerindeki değişiklikleri araştırıldı. MPP+ muamelesinden sonra IHA hücrelerinden total protein izole edildi, GLT-1 ekspresyonu western blot yöntemi ile incelendi ve MPP+ verilen hücrede kontrole oranla anlamlı artış görüldü. MPP+ muamelesi yapılan ve yapılmayan (kontrol) N2A hücre hattından total RNA izole edilerek cDNA üretildi ve Real Time PCR (Gerçek zamanlı Polimeraz Zincir Reaksiyonu) ile GLT-1 mRNA düzeyi ölçüldü. IHA hücrelerinde alınan sonuç ile uyumlu olarak, MPP+ muamelesi yapılan N2A hücrelerinde GLT-1 mRNA seviyesinin kontrol hücrelerine göre anlamlı artışı görüldü. Glutamat salınımı glutamat assay ile ölçüldü. Sonuç olarak, MPP+ ile oluşturulan eksitotoksik durum karşısında, GLT-1 ekspresyonunun bir kurtarıcı mekanizma olarak arttığı gözlendi. Bu nedenle, ilk 12 saatlik dönemde glutamat salınımının azaldığı ancak nörotoksisitenin etkisi devam ettikçe glutamat salınımının artmaya devam ettiği görüldü. Glutamat salınımının azalmasının nedeni aynı zamanda hücre ölümü gerçekleştiği için olabileceği düşünüldü. GLT-1 ekspresyonunun düzenli arttırılması hedef alınarak ilgili moleküler yolakların araştırılması, eksitotoksisiteyi azaltarak Parkinson hastalığına karşı tedavi geliştirilmesi yolunda önemli olacaktır. Anahtar Kelimeler: Eksitotoksisite, GLT-1, glutamat, lewy cisimciği, MPP+, Parkinson | tr_TR |
| dc.description.sponsorship | TPF-18021 | tr_TR |
| dc.description.tableofcontents | İÇİNDEKİLER KABUL VE ONAY SAYFASI i TEŞEKKÜR ii İÇİNDEKİLER iii SİMGELER ve KISALTMALAR DİZİNİ vii ŞEKİLLER DİZİNİ ix TABLOLAR DİZİNİ xi ÖZET xii ABSTRACT xiv 1.GİRİŞ 1 2. GENEL BİLGİLER 3 2.1. Parkinson Hastalığının Tarihçesi ve Epidemiyolojisi 3 2.2. Hastalığa Etkisi Olan Faktörler ve Hastalığın Etiyolojisi 4 2.3. Parkinson Hastalığının Patolojik Özellikleri 5 2.3.1 α-Sinüklein ve Lewy Cisimcikleri 5 2.4 Moleküler Mekanizmalar 8 2.4.1 Mitokondriyal Disfonksiyon 8 2.4.2. Lizozomal Disfonksiyon 8 2.4.3 Oksidatif Stres ve Nitrik Oksit 9 2.4.4. Protein Yanlış Katlanması ve Birikimi 10 2.4.5 Apoptoz ve Nekroz 13 2.5 Eksitotoksisite 13 2.5.1 Glutamat Taşıyıcıları 15 2.5.1.1. Veziküler glutamat taşıyıcıları (VGLUT) 16 2.5.1.2 Eksitatör (uyarıcı) amino asit taşıyıcıları (EAAT) 16 2.5.1.2.1 GLT-1 (EAAT 2) 17 2.5.2. Glutamat Reseptörleri 18 2.5.2.1. İyonotropik glutamat reseptörleri 18 2.5.2.2. Metabotropik glutamat reseptörleri (G-protein bağlı reseptörler) 19 2.5.3 Glutamat-glutamin döngüsü (Glutamat homeostazı) 21 2.5.4 Glutamat Alımı 22 2.5.5 Eksitotoksisitede Ca+2 İyonlarının Rolü 22 2.6. Parkinson’a Yol Açan Faktörler 23 2.6.1. Genetik Faktörler 23 2.6.2. Çevresel Faktörler 23 2.6.2.1. 6-OHDA 24 2.6.2.2 Paraquate ve Rotenone 24 2.6.2.3 MPTP ve MPP+ 25 3. GEREÇ ve YÖNTEM 27 3.1. Materyal Toplanması ve Örneklerin Hazırlanması 27 3.1.1. Kullanılan Laboratuvar Gereçleri 27 3.1.2. Deney Düzeneğinin Hazırlanması 30 3.1.2.1. Hücre kültürü 30 3.1.2.1.1. Hücrelerin çözülmesi 30 3.1.2.1.2 Hücrelerin pasajlanması 31 3.1.2.1.3 Hücrelerin sayımı 31 3.1.2.1.4 Hücrelerin dondurulması 32 3.1.2.2. Hücre hatlarının konsantre edilmiş MPP+(1-methyl-4-phenylpyridinium)’nin uygun dozları ile muamelesi 32 3.1.2.3 MTT testi 34 3.1.2.4 RİPA ile protein izolasyonu metodu 35 3.1.2.5 Protein Miktar Tayini için Bradford Tahlili 36 3.1.2.6 Western blot 38 3.1.2.6.1. Yükleme ve yürütme (Jel Elektroforezi) 38 3.1.2.6.2. Jelden membrana transfer 39 3.1.2.6.3. Bloklama ve antikor uygulaması 40 3.1.2.6.4. Yıkama (Wash) aşamaları 40 3.1.2.6.5 Bloklama ve ikincil antikor uygulaması 40 3.1.2.6.6. Stripping uygulaması (uzaklaştırma tamponu uygulaması) 41 3.1.2.6.7. Western blot için tampon çözeltiler (buffer) 41 3.1.2.7. RNA izolasyonu 42 3.1.2.8. cDNA Sentezi 43 3.1.2.9. Real Time PCR (Gerçek Zamanlı PCR-Kantitatif PCR) 43 3.1.2.10. Glutamat assay 45 3.2. İstatistik 48 4. BULGULAR 49 4.1. MTT Testi Ölçüm Sonuçları ve Değerlendirilmesi 49 4.2. Western Blot Çalışma Sonuçları ve Değerlendirilmesi 51 4.2.1 Bradford Tahlili Ölçüm Sonuçları, Grafikleri ve Değerlendirmeleri 51 4.2.2. Western Blot Çalışması İle Hücre Hatlarındaki GLT-1 Proteininin belirlenmesi 52 4.2.3. Western Blot Çalışmasının Ardından Elde Edilen Bantların Kuantifikasyonu 53 4.3. Real Time (Gerçek Zamanlı) veya QPCR (Kantitatif PCR) Sonuçları 57 4.4. Glutamate Assay Sonuçları ve Değerlendirilmesi 60 5. TARTIŞMA 63 6. SONUÇ ve ÖNERİLER 65 KAYNAKLAR 66 ÖZGEÇMİŞ 71 | tr_TR |
| dc.language.iso | tur | tr_TR |
| dc.rights | info:eu-repo/semantics/closedAccess | tr_TR |
| dc.subject | Research Subject Categories::MEDICINE | tr_TR |
| dc.title | MPP+ (1-METİL-4-FENİLPRİDİNYUM) İLE MUAMELE SONUCU FARE NÖROBLASTOMA (N2A) HÜCRESİNDE OLUŞACAK EKSİTOTOKSİSİTE DURUMUNUN VE GLT-1 SEVİYELERİNİN ARAŞTIRILMASI | tr_TR |
| dc.type | masterThesis | tr_TR |
| dc.contributor.authorID | 622467 | tr_TR |
| dc.contributor.department | Adnan Menderes Üniversitesi, Tıp Fakültesi, Tıbbi Biyoloji Bölümü | tr_TR |
| Appears in Collections: | Yüksek Lisans | |
Files in This Item:
| File | Description | Size | Format | |
|---|---|---|---|---|
| Ceylan AK tez.pdf | 1.34 MB | Adobe PDF | View/Open |
Items in DSpace are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.