Aspergillus flavus HBF34'ün glukoamilaz üretimi, saflaştırılması ve kinetik özelliklerinin belirlenmesi

Abstract

Aspergillus flavus HBF34 susu tarafından fermentasyon ortamında üretilen GA (Glukoamilaz) nisasta afinite kromatografi teknigi ile saflastırıldı. Saflastırılan GA’nın optimum pH ve sıcaklıgı ile stabiliteleri saptandı. GA’nın farklı substratlar için Km ve Vmax degerleri ve substrat spesifiteleri bulundu. GA aktivitesi üzerine metal iyonları, inhibitörler, denatürantlar ve tuz tolerans testi uygulandı. GA’nın ham nisasta adsorbsiyonu saptandı. _nce tabaka kromatografisi ile amilazın tanımlanması yapıldı. Ayrıca PAGE, SDS-PAGE ve zimografi ile enzimin kaç adet oldugunu ve molekül agırlıkları saptandı. Bulunan sonuçlar ilgili literatürlerle karsılastırılarak GA’nın sahip oldugu birçok üstünlüklerden dolayı endüstriyel uygulamalarda kullanılabilecegi sonucuna varıldı.

GA starch produced by Aspergillus flavus HBF34 strain in fermentation medium was purified by affinity chromatography technique. Optimal pH and temperature of purified GA as well as its stability were determined. Km and Vmax values of GA for different substrates and its substrate specificity were estimated. Metal ions, inhibitors, denaturants and salt tolerance test were applied on the activity of GA. Raw starch adsorption of GA was determined. Identification of the amylase was carried out by thin layer chromatography. In addition, number of enzymes and their molecular weight were identified using PAGE, SDS-PAGE and zymography. By comparing with the related literature, the results gained have suggested that GA could be used in the industrial applications due to the features of GA.